普萘洛爾對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移的作用及調(diào)控機制.pdf

1、研究背景:
　　 既往研究認(rèn)為心理應(yīng)激與機體免疫狀態(tài)相關(guān)。慢性應(yīng)激可通過降低NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、降低T細(xì)胞免疫應(yīng)答及影響細(xì)胞因子生成，從而影響細(xì)胞的免疫活性。腫瘤患者的免疫狀態(tài)與其治療反應(yīng)及預(yù)后密切相關(guān)，從而推斷慢性應(yīng)激對腫瘤進展存在影響。應(yīng)激激素包括腎上腺素、去甲腎上腺素(NE)及皮質(zhì)醇，它們在生理狀態(tài)下以維持量存在于外周血中，在應(yīng)激狀態(tài)下可大量分泌，在外周血中的濃度可提升數(shù)十倍。近來研究表明應(yīng)激激素尤其是去甲腎上腺素可明顯

2、促進多種惡性腫瘤的侵襲，而應(yīng)用β受體阻滯劑普萘洛爾(Propranolol)可以有效地逆轉(zhuǎn)該效應(yīng)。基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinase)是一蛋白家族，包括分泌型及膜結(jié)合型蛋白，可以水解膠原蛋白、層粘連蛋白、纖連蛋白及彈力蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)，有利于腫瘤細(xì)胞局部浸潤、侵襲遷移。由于明膠酶譜實驗的簡便性，其中MMP-2/9受到最多的關(guān)注。目前研究表明普萘洛爾可通過抑制NE誘導(dǎo)的MMPs分泌從而逆轉(zhuǎn)其促腫瘤侵襲作用，但其

3、內(nèi)在機制尚不明確。人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是一種高度惡性腫瘤，其復(fù)發(fā)灶多源于手術(shù)切除后腫瘤周邊浸潤或沿白質(zhì)纖維束轉(zhuǎn)移，抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的侵襲遷移對其治療有重要意義。目前普萘洛爾對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移能力的影響尚不清楚。
　　 目的:
　　 研究普萘洛爾對NE作用下膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移能力的影響，并探討其內(nèi)在機制;探討β受體阻滯劑普萘洛爾抗NE誘導(dǎo)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲遷移的可行性。
　　 方法:
　　 用DMEM培養(yǎng)

4、基體外培養(yǎng)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系T98G、U87、U251，以不同濃度NE(0.1～10μmol/L)作為模擬機體應(yīng)激狀態(tài)的實驗組;在加入高濃度NE(10μmol/L)的培養(yǎng)基中加入普萘洛爾(1nmol/L)作為抗應(yīng)激治療的實驗組;在加入高濃度NE(10μmol/L)的培養(yǎng)基中加入U1026作為ERK信號通路阻斷實驗的實驗組;采用無血清DMEM培養(yǎng)基作為實驗對照組。應(yīng)用RT-PCR法檢測人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系β受體表達;Transwel

5、l法評價腫瘤細(xì)胞的遷移能力;采用上室面鋪matrgel的transwell小室法評價腫瘤的侵襲能力;MMT法評價腫瘤增殖能力;明膠酶譜法檢測腫瘤細(xì)胞的MMP-2分泌活性;WesternBlot法檢測腫瘤MMP-2蛋白水平及ERK信號通路的活性;免疫熒光法評估腫瘤細(xì)胞的骨架改變。
　　 結(jié)果:
　　 T98G、U87、U251三系膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞均表達β1、β2受體;NE對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力無明顯影響;NE不引起膠質(zhì)瘤細(xì)胞

6、細(xì)胞骨架明顯改變;NE對腫瘤增值能力無明顯影響;與對照組相比，NE可明顯促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力(P＜0.05)，這種促進效應(yīng)隨著NE濃度的增加而增強，呈劑量依賴性;與對照組相比，NE可明顯促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞的MMP-2分泌活性，這種促進效應(yīng)隨著NE濃度的增加而增強，呈劑量依賴性;與對照組相比，NE可明顯增強膠質(zhì)瘤細(xì)胞ERK信號通路活性;應(yīng)用普萘洛爾(1nmol/L)可以逆轉(zhuǎn)以上NE的促進效應(yīng);應(yīng)用U1026可以抑制NE誘導(dǎo)的MMP-2分泌