毛蕊異黃酮葡糖苷對TAA致BRL-3A細胞氧化應激的保護作用研究.pdf

1、目的：探討毛蕊異黃酮葡糖苷（Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside，CG）對硫代乙酰胺（TAA）致BRL-3A細胞氧化應激的保護作用。
　　方法：以BRL-3A細胞為研究對象，通過TAA（0.18mol/L）損傷BRL-3A細胞2h建立氧化應激模型。用不同濃度的CG對細胞進行預處理（TAA損傷前12h加藥），用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測細胞存活率，試驗設定空白對照組（N組）、氧化損傷組（TAA）組、

2、低濃度（10mg/L）CG組（C1組）、中濃度（20mg/L）CG組（C2組）、高濃度（40mg/L）CG組（C3組）、聯(lián)苯雙酯（DDB）陽性對照組（PC組）。微板法檢測細胞上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT/GPT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST/GOT）活力；微板法、比色法檢測細胞內(nèi)總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力、過氧化氫酶（CAT）活力及丙二醛（MDA）含量；熒光顯微鏡

3、觀察并使用熒光酶標儀和流式細胞儀檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）含量的變化；紫外分光光度計法檢測肝微粒體（microsome）中CYP450和細胞色素b5含量以及CYP2E1活性；Real-time PCR法檢測細胞CYP2E1mRNA的相對表達量；Western Blot法檢測細胞CYP2E1蛋白表達情況。
　　結(jié)果:當TAA濃度為0.18mol/L時，BRL-3A細胞存活率約為50％。TAA誘導的氧化應激導致BRL-3A細胞存活率、

4、抗氧化能力的降低，轉(zhuǎn)氨酶活性、細胞內(nèi)ROS水平、CYP2E1 mRNA的相對表達量和蛋白表達量升高。與TAA組相比，CG預處理組（10mg/L、20mg/L、40mg/L）不同程度地升高細胞存活率、抗氧化能力，降低轉(zhuǎn)氨酶活性、細胞內(nèi)ROS水平、CYP2E1 mRNA的相對表達量和蛋白表達量。其中，以CG濃度為40mg/L時，保護效果最佳。
　　結(jié)論：CG對TAA致BRL-3A細胞的氧化應激具有保護作用，使TAA致細胞氧化應激狀態(tài)得