抗HER2單克隆抗體偶聯(lián)納米白蛋白紫杉醇對(duì)乳腺癌的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:世界范圍內(nèi)乳腺癌發(fā)病率、死亡率高，嚴(yán)重威脅女性的健康。本研究旨在通過“一步法”制備抗HER2單克隆抗體偶聯(lián)納米白蛋白紫杉醇制劑(Abra/anti-HER2)，并通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)HER2陽性乳腺癌的抗腫瘤作用，初步探討其機(jī)制。
　　方法:將納米白蛋白紫杉醇(Abraxane(@))及抗HER2單克隆抗體（anti-HER2monoclonal antibody）通過EDC/NHS法進(jìn)行一步偶聯(lián)。利用透射電鏡(TEM)

2、及動(dòng)態(tài)光散射(DLS)檢測(cè)偶聯(lián)納米粒的形態(tài)及粒徑分布，設(shè)立空白對(duì)照組、Taxol(@)、Abraxane(@)及Abra/anti-HER2納米藥物組，分別從體內(nèi)及體外比較其對(duì)HER2陽性乳腺癌(SKBR-3)的抗腫瘤作用。CCK-8法檢測(cè)藥物的細(xì)胞毒作用，DAPI染色觀察藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞核形態(tài)變化，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)藥物處理后細(xì)胞周期分布變化，蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)藥物處理后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平變化。構(gòu)建荷瘤裸

3、鼠模型，尾靜脈注射藥物，觀察腫瘤大小變化及裸鼠生存曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后切取裸鼠重要器官行H-E染色。另將藥物與近紅外染料NIR-797進(jìn)行物理吸附，利用小動(dòng)物活體成像儀實(shí)時(shí)觀察藥物在裸鼠體內(nèi)的分布。
　　結(jié)果:本研究成功構(gòu)建Abra/anti-HER2納米藥物，DLS及TEM證實(shí)其粒徑分布均勻，大小約為100nm;CCK-8結(jié)果顯示Abra/anti-HER2納米藥物處理SKBR-3細(xì)胞48h后測(cè)得IC50遠(yuǎn)低于其它組別(0.002μ

4、g/mL VS0.04μg/mL(Taxol(@))、0.02μg/mL(Abraxane(@))，p＜0.05);DAPI結(jié)果顯示相較于其它兩組，Abra/anti-HER2納米藥物組可觀察到更多的核固縮及凋亡小體等凋亡征象;FCM檢測(cè)結(jié)果顯示Abra/anti-HER2納米藥物組的S期阻滯率較其它兩組明顯升高(66.63±2.21％VS45.61±4.47％(Taxol(@))、54.99±2.01％(Abraxane(@))，p＜

5、0.05);為進(jìn)一步探討凋亡機(jī)制，使用Western blot對(duì)凋亡相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果示caspase3等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)上調(diào)，提示藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡為其抗腫瘤機(jī)制;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)Abra/anti-HER2納米藥物具有更強(qiáng)的腫瘤抑制率（0.336±0.027cm3VS2.210±0.138cm3（生理鹽水對(duì)照組），p＜0.05）及更好的機(jī)體耐受性，小動(dòng)物活體近紅外成像可見Abra/anti-HER2納米藥物組的信號(hào)相比Abraxane