抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18在乳腺癌中的抗腫瘤作用及其機理.pdf

1、近年來乳腺癌已經(jīng)成為女性最常見的惡性腫瘤。每年乳腺癌的發(fā)病率都在不斷攀升，其中以包括我國在內(nèi)的發(fā)展中國家最為迅速。
　　乳腺癌的死亡率一直居高不下，特別是ErbB2過表達的乳腺癌患者。ErbB2基因在25％-30％的乳腺癌患者的癌組織中有過度表達，此類ErbB2過表達的乳腺癌生長速度快、侵襲性強，易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感，易復發(fā)。故無病生存期短，預后差。
　　Trastuzumab，曲妥珠單克隆抗體，(商品名赫賽汀，

2、Herceptin)，是由羅氏制藥生產(chǎn)的靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構域Ⅳ區(qū)的人源化IgG1型抗體，已于1998年獲得美國FDA批準用于ErbB2高表達轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療。但臨床數(shù)據(jù)顯示約70％的ErbB2過表達的乳腺癌患者對Trastuzumab治療不產(chǎn)生反應，且大部分對Trastuzumab發(fā)生反應的患者也會在治療開始1年內(nèi)產(chǎn)生耐藥。
　　Pertuzumab，帕妥珠單克隆抗體，(商品名Perjeta)，是由羅氏制藥生產(chǎn)的另一株

3、靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構域Ⅱ區(qū)的人源化單克隆抗體。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚體和配體非依賴的異源二聚體，而Pertuzumab抑制配體依賴的ErbB2異源二聚體，兩者具有互補的抗腫瘤作用機理，故其聯(lián)合用藥被FDA批準為一線治療。盡管臨床試驗證實Trastuzumab和Pertuzumab的聯(lián)合用藥在Trastuzumab耐藥的患者中體現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性，但其客觀反應率僅為25％，而完全反應率低于8％。為了進一

4、步提高ErbB2靶向抗體的療效，通過篩選全人源噬菌體抗體庫獲得了一株靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構域Ⅰ區(qū)的全人源單克隆抗體——H2-18，并且驚奇地發(fā)現(xiàn)其能夠強有力地誘導ErbB2過表達乳腺癌細胞發(fā)生程序性細胞死亡(PCD)。
　　本文將深入研究H2-18在ErbB2過表達乳腺癌細胞，特別是在Trastuzumab耐藥乳腺癌細胞中的抗腫瘤作用，并分析其作用機理，尤其是闡述其誘導程序性細胞死亡的作用機制。
　　通過MTS方法檢測

5、的細胞活力實驗數(shù)據(jù)表明，雖然在Trastuzumab敏感細胞BT474和SKBR-3中，H2-18的作用效果遜色于Trastuzumab+Pertuzumab聯(lián)用組及Trastuzumab單藥組，但在Trastuzumab耐藥細胞HCC1954及HCC1419中的作用效果卻是最強的。并且其活力抑制率與其在敏感細胞中的相似，并未受耐藥機制影響，暗示H2-18的作用機制不同于Trastuzumab。
　　流式AnnexinⅤ及PI雙染

6、法結(jié)果顯示在Trastuzumab敏感及耐藥細胞中，H2-18皆能明顯誘導其死亡，死亡細胞主要位于右上雙陽性區(qū)。而其他抗體組不能產(chǎn)生這種作用。
　　在體內(nèi)實驗中，構建了Trastuzumab耐藥乳腺癌荷瘤裸鼠模型，通過對腫瘤大小及生長速度的觀察，評價出H2-18組較其他抗體組具有明顯優(yōu)勢。
　　在對H2-18誘導程序性細胞死亡的機制研究中，利用TEM觀察細胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)其不具有凋亡的特征，卻與壞死更相似。并且這是一種caspa

7、se非依賴的，Bcl-2家族沒有參與調(diào)節(jié)的程序性壞死。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，此死亡通路由激活受體相互作用蛋白1(RIP1)而觸發(fā)，導致活性氧簇(ROS)產(chǎn)生增加。升高的ROS激活JNK通路，JNK被磷酸化激活后轉(zhuǎn)位入核，磷酸化其底物c-Jun，活化的c-Jun最后通過轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)實現(xiàn)細胞的程序性死亡。
　　H2-18能夠有效抑制ErbB2過表達乳腺癌的生長，特別是Trastuzumab耐藥乳腺癌的生長;并且因其具有獨特的PCD誘導活