不同來(lái)源黃芪的AFLP標(biāo)記和代謝譜分析.pdf

1、黃芪是一種常用的中藥，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的人工栽培、雜交選育和自然選擇已形成大量品種，然而來(lái)源復(fù)雜，品種混淆嚴(yán)重。本研究采用DNA分子標(biāo)記及代謝標(biāo)識(shí)物鑒別相結(jié)合的分析技術(shù)，對(duì)不同來(lái)源的中藥材黃芪進(jìn)行區(qū)分，力求解決中藥材黃芪遺傳背景復(fù)雜、野生與栽培藥材、不同產(chǎn)地藥材的鑒別困難的問題。本論文有機(jī)結(jié)合現(xiàn)代分子標(biāo)記技術(shù)及代謝組學(xué)最新研究技術(shù)，為中藥材的鑒別提供新的思路和方法。 1、采用AFLP技術(shù)對(duì)19個(gè)不同產(chǎn)地的蒙古黃芪和膜莢黃芪進(jìn)行分析。通過(guò)

2、28對(duì)引物的篩選，共選取了11對(duì)選擇性擴(kuò)增引物。對(duì)不同產(chǎn)地，不同品種黃芪進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)差異條帶85條。利用MEGA軟件進(jìn)行聚類分析，蒙古黃芪為一組，膜莢黃芪分了兩組，基本能夠?qū)⒉煌S芪種質(zhì)資源進(jìn)行區(qū)分。不同產(chǎn)地的膜莢黃芪按地域分布集中，河北和山東產(chǎn)膜莢黃芪集中在一起，而2個(gè)吉林產(chǎn)膜莢黃芪較好集中在一起。而蒙古黃芪地域分布相對(duì)分散，野生黃芪聚類較好，但是有個(gè)別產(chǎn)地的蒙古黃芪聚類到膜莢黃芪中去。 2、采用現(xiàn)代分析儀器(GC-T

3、OF/MS)對(duì)不同來(lái)源黃芪脂相和水相代謝物分別進(jìn)行代謝譜分析。利用ChromaTOF和XCMS(R platform)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理；用SIMCA-P軟件對(duì)進(jìn)行規(guī)一化、中心化后，進(jìn)行主成分分析(PCA)，偏最小二乘一判別分析(PLS-DA)，正交偏最小二乘-判別分析(OPLS)。結(jié)果表明，利用PCA和PLS對(duì)蒙古黃芪和膜莢黃芪脂相和水相分析，可以將兩個(gè)黃芪品種區(qū)分開。對(duì)蒙古黃芪和膜莢黃芪脂相PLS-DA分析得到10種代謝標(biāo)識(shí)物，對(duì)蒙

4、古黃芪和膜莢黃芪水相PLS分析得到11種代謝標(biāo)識(shí)物。不同產(chǎn)地的膜莢黃芪按地域分布集中，而蒙古黃芪地域分布相對(duì)分散。吉林四平和吉林通化的膜莢黃芪脂相非常接近，山東菏澤和河北保定的栽培膜莢黃芪脂相比較接近，甘肅漳縣的野生膜莢黃芪水相、黑龍江鶴崗的野生膜莢黃芪水相與其它膜莢黃芪水相差異都非常顯著。 分子標(biāo)記技術(shù)(AFLP)和GC-TOF/MS代謝組學(xué)技術(shù)，對(duì)19個(gè)不同產(chǎn)地的蒙古黃芪和膜莢黃芪都能夠區(qū)分開來(lái)，并且呈現(xiàn)一些地域分布特征，各