miR-132在膿毒癥肺損傷小鼠中的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　觀察膿毒癥肺損傷小鼠肺組織中miR-132的動態(tài)表達變化以及肺內(nèi)上調(diào)miR-132的表達后對膽堿酯酶及炎癥反應(yīng)的影響，探討miR-132對膿毒癥肺損傷小鼠的肺保護作用及機制。
　　方法：
　　1.選擇雄性健康SPF級BABL/c小鼠；采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）構(gòu)建小鼠膿毒癥肺損傷模型，模型構(gòu)建成功后，病理切片檢測肺損傷程度；ELISA檢測肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表

2、達變化；計算肺濕干重比值；用RT-qPCR檢測肺組織中miR-132的表達變化；用Western blot檢測肺組織AchE蛋白含量變化；T-CHE試劑盒檢測BALF中AchE活性。
　　2.選擇氣管內(nèi)滴入in vivo-jetPEITM介導(dǎo)的miR-132，轉(zhuǎn)染成功后采用CLP構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型，造模24小時后處死小鼠。留取左肺行肺泡灌洗，用ELISA檢測BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表達變化；留取右肺，

3、病理切片觀察肺損傷程度，稱量、烘干，計算濕干重比值，用RT-qPCR檢測肺組織中miR-132的表達變化，用Western blot檢測肺組織AchE蛋白含量變化，T-CHE試劑盒檢測BALF中AchE活性。
　　結(jié)果：
　　1. CLP能夠成功構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型，病理結(jié)果顯示造模6 h小鼠開始出現(xiàn)肺損傷，損傷程度隨時間延長而逐漸加重，24 h小鼠肺損傷最嚴重；肺濕干重比值在CLP術(shù)后6 h開始增加，肺水腫逐漸加重，24

4、h肺水腫最嚴重，隨后肺水腫逐漸減輕；BALF中炎癥因子表達量在CLP術(shù)后逐漸增加，TNF-α表達于12 h、24 h達高峰，IL-1β、IL-6于24 h達高峰，48 h后均開始逐漸下降。
　　2.膿毒癥會誘導(dǎo)肺組織miR-132表達上調(diào)，CLP術(shù)后6 h開始，miR-132的表達量逐漸升高，12 h、24 h達高峰（13.27±1.21倍、14.31±1.24倍），48 h開始下降。
　　3.經(jīng)氣道內(nèi)滴入in vivo-j

5、etPEITM介導(dǎo)的miR-132能夠成功上調(diào)肺內(nèi)的miR-132的表達，轉(zhuǎn)染后24 h表達達高峰；病理結(jié)果示轉(zhuǎn)染組膿毒癥小鼠肺損傷程度較假轉(zhuǎn)染組減輕；肺組織水腫減輕；BALF中炎癥因子表達下降，上調(diào)肺內(nèi)miR-132能夠降低膿毒癥肺損傷小鼠的肺部炎癥反應(yīng)。
　　4.膿毒癥肺損傷模型構(gòu)建成功后發(fā)現(xiàn)肺組織中AchE表達隨CLP術(shù)后時間延長而逐漸增加，BALF中AchE活性亦增加；上調(diào)肺內(nèi)miR-132后肺組織中AchE蛋白表達及BA