烏司他丁對膿毒癥幼鼠肺損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　1.采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture，CLP)法制備膿毒癥幼鼠模型，觀察膿毒癥致急性肺損傷(ALI)程度及炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、高遷移率族蛋白-1(HMGB-1)釋放情況。
　　2.研究幼鼠膿毒癥致ALI過程中是否存在JAK-STAT信號通路的激活及其與HMGB-1釋放的關(guān)系。
　　3.研究烏司他丁(UTI)對膿毒癥致ALI可能的保護作用機制。

2、r>　　方法：
　　1．實驗分組：128只4周齡雄性SD大鼠按完全隨機分組分為以下4組(每組n=32)：正常對照組(Ctrl組)、假手術(shù)組(Sham組)、膿毒癥組(CLP組)、烏司他丁治療組(UTI組)；每組再分為四個時間點：6 h、12 h、24 h、48 h。Ctrl組不做其他處理,僅0 h、24 h經(jīng)尾靜脈注射同劑量NS(5 ml/kg);Sham組僅行開腹手術(shù)，并翻動盲腸后關(guān)腹，不結(jié)扎和穿刺盲腸，術(shù)后立即經(jīng)股內(nèi)側(cè)皮下注射N

3、S(30 ml/kg)進行液體復蘇，并于0 h、24 h經(jīng)尾靜脈注射同劑量NS(5 ml/kg)以代替UTI；CLP組開腹行CLP術(shù)，術(shù)畢立即經(jīng)股內(nèi)側(cè)皮下注射NS(30 ml/kg)進行液體復蘇，并于0 h、24 h經(jīng)尾靜脈注射同劑量NS(5 ml/kg)以代替UTI;UTI組開腹行CLP術(shù)，術(shù)畢立即股內(nèi)側(cè)皮下注射NS(30 ml/kg)進行液體復蘇，并于0 h、24 h經(jīng)尾靜脈注射UTI(用量50 mg/kg，用NS配制成注射液用量相

4、當于5 ml/kg)。
　　2.標本收集：各組幼鼠于6 h、12 h、24 h、48 h四個時間點分別迅速開胸,心臟取血用于ELISA測定血清TNF-a。采集肺組織標本，取右肺下葉，置于濾紙吸干表面水分后稱濕重，再置于60℃恒溫箱烘烤48 h,至恒重后稱干重，計算肺濕/干重比(W/D)；將左肺組織置于4％中性甲醛中固定后石蠟包埋，用于HE和免疫組化染色。
　　3.觀察指標：HE染色、光鏡下觀察肺臟組織病理形態(tài)學變化；肺W/D

5、測定；ELISA法測定血清 TNF-α水平；免疫組織化學染色法測定肺臟組織HMGB-1、P-JAK2、P-STAT3蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.一般表現(xiàn)：CLP組幼鼠術(shù)后出現(xiàn)病態(tài)表現(xiàn)：嗜睡，活動、攝食減少，口腔眼角分泌物增多，呼吸加快、發(fā)紺。剖腹可見腹腔積有血性滲出液伴惡臭，盲腸腫脹、變黑；UTI組病態(tài)表現(xiàn)較輕；Ctrl、Sham組無以上病態(tài)表現(xiàn)。
　　2.肺W/D測定：與Ctrl組、Sham比較，CLP組、UTI

6、組各時間點肺W/D升高(P<0.01)；與CLP組相比較，UTI組肺W/D降低(P<0.01)；
　　3.肺臟組織病理形態(tài)變化：與Ctrl組、Sham組比較，CLP組病理改變明顯，肺泡間隔增寬，肺泡腔充血水腫，肺間質(zhì)有炎性細胞浸潤；UTI組肺泡間隔稍增寬，肺泡充血水腫、間質(zhì)炎性細胞浸潤均比同時間點CLP組減輕。
　　4.血清TNF-α水平：與Ctrl組、Sham組比較，CLP組與UTI組各時間點TNF-α水平升高(P<0.0

7、1)，6 h升高，12 h達高峰，之后遞減但仍高于Ctrl組、Sham組；與CLP組相比較，UTI組血清TNF-a含量顯著降低(P<0.01)。
　　5.肺臟組織HMGB-1蛋白表達：與Ctrl組、Sham組比較，CLP組與UTI組各時間點肺組織HMGB-1蛋白表達顯著升高(P<0.01)，6 h開始升高，且于6-24 h內(nèi)隨時間推移蛋白表達顯著增多，持續(xù)至48 h；與CLP組比較，UTI組各時間點HMGB-1蛋白表達均顯著下降(

8、P<0.01)。
　　6.肺臟組織P-JAK2、P-STAT3蛋白表達：與Ctrl組、Sham組比較，CLP組與UTI組各時間點肺組織P-JAK2、P-STAT3蛋白表達顯著升高(P<0.01)，6 h-24h逐漸升高，48 h有所下降但仍高于Ctrl組、Sham組。與CLP組比較，UTI組各時間點P-JAK2蛋白表達均顯著下降(P<0.01)。
　　7.肺臟組織P-JAK2、P-STAT3表達與HMGB-1之間進行相關(guān)性分

9、析：肺臟組織P-JAK2、P-STAT3蛋白表達分別與HMGB-1蛋白表達于CLP后6 h、12 h、24 h、48 h四個時間點成正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.本實驗采用CLP法成功復制膿毒癥致ALI幼鼠動物模型。
　　2.炎癥介質(zhì)TNF-α、HMGB-1大量釋放參與膿毒癥ALI的發(fā)病過程。
　　3．膿毒癥ALI發(fā)病過程存在JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導通路的激活。
　　4． UTI對膿毒癥ALI具有一定保護作