特勒內(nèi)酯的抗腫瘤活性及機制研究.pdf

1、隨著人類生存環(huán)境和生活習(xí)性的改變，在一些不利的外部環(huán)境作用下，腫瘤的發(fā)病率正在逐步上升，已經(jīng)成為嚴重威脅人類健康的常見疾病。肝癌是世界各地成人中常見的高死亡率的原發(fā)性腫瘤之一?；熓悄壳芭R床上治療肝癌最常見的、有效的策略。天然藥物在癌癥的化療中扮演著非常重要的角色。特勒內(nèi)酯是從金挖耳中提取的一種桉烷內(nèi)酯類化合物。金挖耳是一種中草藥具有其解熱，鎮(zhèn)痛和抗炎、殺菌的作用。有研究報道，特勒內(nèi)酯對多種人類的腫瘤細胞具有強烈的細胞毒性。
　　

2、我們首先用MTT法篩選了幾種金挖耳提取物，對腫瘤細胞株Smmc-7721，HepG-2，LX-2，A549，U87以及正常細胞HL-7702的生長抑制作用，結(jié)果顯示特勒內(nèi)酯具有最強細胞毒性，而對正常細胞株HL-7702的細胞毒性與腫瘤細胞相比顯著降低，表明腫瘤細胞對特勒內(nèi)酯更為敏感。我們篩選出抑制增殖作用尤為顯著的肝癌細胞進行作用機理的初步探討。接著通過DAPI染色，熒光顯微鏡觀察及AnnexinⅤ/PI雙染后流式細胞儀檢測細胞凋亡，我

3、們可以看到特勒內(nèi)酯誘導(dǎo)的肝癌細胞死亡過程中會出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮，凋亡小體形成，磷脂酰絲氨酸暴露在細胞膜外表面等現(xiàn)象。這些現(xiàn)象說明，特勒內(nèi)酯是通過凋亡的方式誘導(dǎo)肝癌細胞死亡。
　　流式細胞儀分析結(jié)果表明特勒內(nèi)酯會誘導(dǎo)肝癌細胞線粒體膜電勢降低，細胞內(nèi)自由的鈣離子濃度升高，活性氧水平增加。除此之外，WesternBlot實驗表明，特勒內(nèi)酯會降低肝癌細胞中Apaf-1和Bcl-2的表達，增加Bax的表達，誘導(dǎo)細胞色素C從線粒體中釋放，活化ca

4、spase-9和caspase-3引發(fā)了caspase的級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細胞凋亡。這些結(jié)果表明特勒內(nèi)酯是通過線粒體介導(dǎo)的凋亡通路來誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。為開發(fā)新型治療肝癌的藥物，特勒內(nèi)酯值得進一步的深入研究。
　　后來我們的實驗進一步發(fā)現(xiàn)特勒內(nèi)酯在誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡之前會阻滯細胞周期進程。我們的數(shù)據(jù)表明特勒內(nèi)酯誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生會導(dǎo)致p38MAPK的磷酸化。很多研究表明，p38MAPK不僅參與炎癥反應(yīng)，而且在應(yīng)激反應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞增殖

5、、細胞周期阻滯及凋亡中都發(fā)揮著重要作用。據(jù)報道，p38MAPK可以通過控制Cdc25的磷酸化來介導(dǎo)細胞G2/M期阻滯。
　　流式細胞儀分析顯示特勒內(nèi)酯誘導(dǎo)肝癌細胞G2/M期阻滯成濃度和時間依賴性。用特勒內(nèi)酯處理HepG-2細胞24h后，對照組細胞G2/M期分布占8.37％，15μmol/L特勒內(nèi)酯G2/M期所占50.88％。WesternBlot結(jié)果顯示特勒內(nèi)酯顯著地了增加了phospho-p38，phospho-MAPKAPK-

6、2，phospho-Cdc25A和phospho-Cdc2的表達，降低了Cdc-25，Cdc-2和CyclinB1蛋白的表達。同時，p38MAPK抑制劑SB203580(2.5μmol/L)可以顯著的降低特勒內(nèi)酯誘導(dǎo)產(chǎn)生的G2/M期阻滯，并提高細胞的存活率。當(dāng)HepG-2細胞用SB203580(5μmol/L)預(yù)處理1h后，細胞在15μmol/L特勒內(nèi)酯48h的存活率由原來31.67％提高到61.8％，G2/M期細胞由原來的50.88％