精子型乳酸脫氫酶LDH-C4在高原鼠兔體細(xì)胞中表達(dá).pdf

1、高原鼠兔（Ochotona curzoniae）是一種生活在青藏高原海拔3000～5000m地區(qū)，對(duì)低溫，低氧有很好耐受性的小型嚙齒類土著動(dòng)物。前期研究表明雌雄高原鼠兔心臟，肝臟，肺，腎臟，大腦，骨骼肌的LDH同工酶譜均顯示一致的六條帶，并且和睪丸組織的LDH同工酶譜完全一致，我們推測(cè)LDH-C4在高原鼠兔體細(xì)胞中表達(dá)。
　　為了證實(shí)LDH-C4在高原鼠兔體細(xì)胞中表達(dá)，通過分子克隆方法在高原鼠兔體細(xì)胞克隆Ldh-a，Ldh-b，L

2、dh-c的序列；通過RealtimePCR檢測(cè)不同海拔高原鼠兔Ldh-a，Ldh-b，Ldh-c的表達(dá)量；通過原核表達(dá)系統(tǒng)分離純化高原鼠兔LDH-C4，結(jié)合乳酸脫氫酶同工酶的熱穩(wěn)定性，利用活性染色法確定LDH-C4在高原鼠兔體細(xì)胞乳酸脫氫酶同工酶譜中的位置。
　　結(jié)果表明：1.高原鼠兔Ldh-a基因全長1693bp，編碼區(qū)長度為999bp，高原鼠兔Ldh-a的編碼區(qū)與牛，人，大鼠，小鼠，兔子的同源性分別為87.89％，88.19%

3、，85.69%，86.29%，88.99%和88.49%；高原鼠兔Ldh-b基因全長1299bp編碼區(qū)長度為1005bp，鼠兔Ldh-b的編碼區(qū)序列與牛，人，大鼠，小鼠，猩猩的同源性分別為88.46%，90.15%，86.67%，86.47%，90.15%；Ldh-c在高原鼠兔心臟，肝臟，肺，腎臟，大腦中表達(dá)，編碼區(qū)與睪丸中Ldh-c的序列完全一致，高原鼠兔體細(xì)胞Ldh-c與Ldh-a，Ldh-b的同源性分別為74%和68%。2.隨著海

4、拔高度的增加在高原鼠兔心臟中，Ldh-a，Ldh-b的表達(dá)量極顯著下降（P<0.01），Ldh-c的表達(dá)量下降差異不顯著（P>0.05）；隨著海拔高度的增加高原鼠兔肝臟中，Ldh-a，Ldh-b的表達(dá)量下降差異不顯著（P>0.05），Ldh-c的表達(dá)量極顯著下降（P<0.01）；隨著海拔高度的增加高原鼠兔肺中Ldh-a表達(dá)量顯著下降（P<0.05），Ldh-b，Ldh-c的表達(dá)量下降差異不顯著（P>0.05）；隨著海拔高度的增加高原鼠兔

5、腎臟中Ldh-a的表達(dá)量增加差異不顯著（P>0.05），Ldh-b表達(dá)量下降差異不顯著（P>0.05），Ldh-c表達(dá)量極顯著減少（P<0.01）；隨著海拔高度的增加高原鼠兔大腦中Ldh-a（P<0.05）和Ldh-b（P<0.01）的表達(dá)量顯著降低，Ldh-c表達(dá)量下降但差異不顯著（P>0.05）；隨著海拔高度的增加高原鼠兔骨骼肌中Ldh-a的表達(dá)量降低差異不顯著（P>0.05），Ldh-b表達(dá)量顯著下降（P<0.05），Ldh-c表

6、達(dá)量極顯著減少（P<0.01）；隨著海拔高度的增加在高原鼠兔睪丸中，Ldh-a，Ldh-b，Ldh-c的表達(dá)量下降但差異不顯著（P>0.05）3.成功構(gòu)建高原鼠兔LDHC原核表達(dá)系統(tǒng)，分離純化得到了具有酶活性的高原鼠兔LDH-C4。4.通過乳酸脫氫酶活性染色法，結(jié)合乳酸脫氫酶同工酶的熱穩(wěn)定性，證實(shí)高原鼠兔體細(xì)胞乳酸同工酶譜中從陰極到陽極的第三條帶是LDH-C4。結(jié)果表明Ldh-c在高原鼠兔的體細(xì)胞中表達(dá)，體細(xì)胞中LDH-C4的表達(dá)可能是