烏梅各組分生物活性研究及提取工藝優(yōu)化.pdf

1、目的：通過(guò)比較烏梅炮制前后各化學(xué)成分含量的差異，為烏梅的合理炮制和質(zhì)量控制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。對(duì)烏梅各組分進(jìn)行了體外抗氧化、抑菌、抑制和破壞細(xì)菌生物膜等作用的詳細(xì)研究，明確烏梅的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為烏梅的開(kāi)發(fā)利用奠定了理論依據(jù)，也為完善《中國(guó)藥典》烏梅的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供了實(shí)驗(yàn)參考。采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化烏梅有效部位的提取工藝條件，為烏梅資源進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用紫外分光光度法比較青梅和烏梅總多糖和總黃酮的含量；采用酸

2、堿滴定法、高效液相色譜法分別比較青梅和烏梅總有機(jī)酸和枸櫞酸的含量。利用消除DPPH自由基、消除羥基自由基和還原Fe3+能力的方法評(píng)價(jià)烏梅各組分的抗氧化活性能力。采用最小抑菌濃度（MIC）法評(píng)價(jià)烏梅各組分的抑菌活性能力。構(gòu)建金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和溶珊瑚弧菌生物膜模型，比較烏梅各組分抑制和破壞細(xì)菌生物膜作用。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，分別以總有機(jī)酸和總黃酮提取率為指標(biāo)，采用響應(yīng)面分析法研究了液固比、浸泡時(shí)間和提取時(shí)間對(duì)烏梅總有機(jī)酸提取率的影響

3、；乙醇體積分?jǐn)?shù)、液固比和提取時(shí)間對(duì)烏梅總黃酮提取率的影響。
　　結(jié)果：青梅總多糖含量為2.39±0.02％，而烏梅總多糖含量為2.12±0.03%。青梅總黃酮含量為3.24±0.04%，而烏梅總黃酮含量為4.64±0.06%。青梅總有機(jī)酸含量為27.87±0.09%，而烏梅總有機(jī)酸含量為33.04±0.25%。青梅枸櫞酸的含量為2.51±0.07%，而烏梅枸櫞酸的含量為13.15±0.1%。烏梅總提取物清除DPPH自由基和羥基自由

4、基的IC50值（以生藥計(jì)）分別為0.531±0.11 mg/mL和0.380±0.09 mg/mL；總多糖IC50值（以生藥計(jì)）分別為3.174±0.64 mg/mL和6.894±0.72 mg/mL；總有機(jī)酸IC50值（以生藥計(jì)）分別為1.717±0.31 mg/mL和2.596±0.52 mg/mL；總黃酮IC50值（以生藥計(jì)）分別為0.565±0.06 mg/mL和1.147±0.34 mg/mL。烏梅各組分抗氧化能力（折合等量生

5、藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總黃酮>總有機(jī)酸>總多糖。烏梅總提取物、總有機(jī)酸和總黃酮抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總黃酮>總有機(jī)酸；抑制溶珊瑚弧菌的能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總有機(jī)酸>總黃酮。烏梅總提取物、總有機(jī)酸和總黃酮對(duì)細(xì)菌生物膜具有抑制作用。但對(duì)于不同菌種，其抑制能力有所不同。對(duì)于金黃色葡萄球菌，其抑制能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總黃酮>總有機(jī)酸。對(duì)于大腸桿菌，

6、其抑制能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總有機(jī)酸>總黃酮。對(duì)于溶珊瑚弧菌，其抑制能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：總黃酮>總有機(jī)酸>烏梅總提取物。烏梅各組分對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜無(wú)破壞作用。對(duì)于大腸桿菌，烏梅總提取物、總有機(jī)酸和總黃酮破壞能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：總黃酮>總有機(jī)酸>烏梅總提取物。對(duì)于溶珊瑚弧菌，其破壞能力（折合等量生藥）強(qiáng)弱為：烏梅總提取物>總有機(jī)酸>總黃酮。烏梅總有機(jī)酸的最佳提取工藝條件：液固比為14:1 mL/g

7、，浸泡時(shí)間為70 min，提取時(shí)間為1.5 h，提取2次，在此條件下，烏梅總有機(jī)酸的提取率為35.21%。烏梅總黃酮的最佳提取工藝條件：乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%，液固比為40:1 mL/g，提取時(shí)間為3 h，提取2次，在此條件下，烏梅總黃酮的提取率為5.04%。
　　結(jié)論：首次比較了烏梅炮制前后化學(xué)成分的差異性，發(fā)現(xiàn)青梅總多糖含量略高于烏梅。但是對(duì)于總黃酮、總有機(jī)酸、枸櫞酸含量，二者均有明顯的差異，且烏梅高于青梅。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明烏