蛹蟲草子實(shí)體活性多肽的提取分離方法及其部分生物活性的研究.pdf

1、蛹蟲草,又名北冬蟲夏草、北蟲草,與冬蟲夏草同屬異種。研究表明蛹蟲草具有與冬蟲夏草極相似的有效成分和藥用功效,如益精氣、補(bǔ)虛損、抑菌、降壓、鎮(zhèn)靜、降溫、免疫作用等。但天然冬蟲夏草資源有限、價(jià)格昂貴,不利于廣泛應(yīng)用,相比之下人工蛹蟲草更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,因此很多人都認(rèn)為蛹蟲草可以從某種意義上替代冬蟲夏草。對(duì)蛹蟲草子實(shí)體中的化學(xué)成分進(jìn)行全面測(cè)定分析后得知其中含有蛋白質(zhì)、脂肪、蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖、SOD酶以及一些微量元素,充分證實(shí)了蛹蟲草的營(yíng)養(yǎng)和

2、藥用價(jià)值。眾所周知,多肽是機(jī)體完成各種生理活性必不可少的一種物質(zhì),在生物的代謝活動(dòng)和疾病治療中也起著不可取代的作用。因此該研究現(xiàn)已成為一大熱點(diǎn),但縱觀目前國(guó)內(nèi)外的研究報(bào)告,關(guān)于蛹蟲草蛋白多肽類的報(bào)道卻并不多,本文對(duì)蛹蟲草子實(shí)體中多肽的提取、分離純化及部分生物活性進(jìn)行研究,旨在為日后蛹蟲草蛋白多肽類物質(zhì)的研究應(yīng)用提供參考意見。
　　 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.采用水提醇沉法和酶解法制備蛹蟲草子實(shí)體活性多肽提取

3、液。兩種方法均各從單因素考察和正交試驗(yàn)法確定了最佳工藝條件。水提醇沉法的工藝條件為:溫度4℃,時(shí)間6h,料水比1:10,pH9,水醇比1:1;酶解法的工藝條件為:胃蛋白酶和胰蛋白酶雙酶水解,溫度為42℃,時(shí)間為8h,底物濃度為6%,加酶量2.5%。
　　 2.對(duì)所制備的蛹蟲草子實(shí)體的多肽提取液進(jìn)行理化性質(zhì)鑒定,并采用Tricine-SDS-Pagc電泳法鑒定小分子肽的存在。結(jié)果顯示:制備的提取液為淡黃棕色和棕黃色透明液體,蛋白質(zhì)

4、定性反應(yīng)檢測(cè)中均為陽(yáng)性反應(yīng),紫外分光光度計(jì)于190.0-400.0nm范圍內(nèi)掃描知提取液在208nm(203nm)、260nm附近有兩個(gè)吸收峰;電泳結(jié)果顯示提取液中含有小分子肽類物質(zhì)。
　　 3.采用兩步凝膠色譜法分離蛹蟲草子實(shí)體的多肽提取液,兩步葡聚糖凝膠色譜法的分離條件分別為SephadexG-100.柱30cm*4.0cm,洗脫液為去離子水,洗脫速度為50mL/h,上樣體積為4mL,紫外檢測(cè)器于280nm下檢測(cè);Sepha

5、dexG-25:柱40cm*3.0Ocm,洗脫液為去離子水,流速為100mL/h,上樣體積為3mL,紫外檢測(cè)器于280nm下檢測(cè)。經(jīng)由SephadexG-100柱洗脫出一個(gè)色譜峰,再經(jīng)SephadexG-25柱分離檢測(cè),得到兩個(gè)分離組分。
　　 4.分離出的組分分別進(jìn)行氨基酸組成及含量分析,結(jié)果表明內(nèi)含的氨基酸種類豐富齊全,人體所必需的氨基酸含量較高。
　　 5.對(duì)分離出的組分進(jìn)行部分生物活性研究,包括采用化學(xué)模擬體系進(jìn)