基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的蟬花和冬蟲夏草中主要核苷類成分的比較及蟬花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、蟬花，為麥角菌科真菌大蟬草Cordyceps cicadae Shing的無(wú)性型蟬擬青霉Paecilomyces cicadae（Miq.）Samson寄生在山蟬 Cicada flammata Dist幼蟲上的真菌孢梗束或子座及幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。冬蟲夏草，為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。《中國(guó)藥典》對(duì)冬蟲夏草有收錄，蟬花收錄于

2、地方標(biāo)準(zhǔn)《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中。蟬花主要產(chǎn)于江蘇、浙江、福建、四川、西藏等地，而冬蟲夏草主要分布于青海、西藏、四川、云南、甘肅和貴州等省及自治區(qū)。蟬花和冬蟲夏草同屬于麥角菌科，并且具有相似的藥理作用。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，蟬花和冬蟲夏草均具有治療腎衰、增強(qiáng)免疫功能、抗疲勞、抗腫瘤等藥理活性。
　　本研究建立了快速、靈敏的HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定了不同產(chǎn)地的20批蟬花和12批冬蟲夏草藥材中13種核苷類成分的含量，并同時(shí)測(cè)定了10批

3、蟬花和6批冬蟲夏草的幼蟲和子實(shí)體中的含量，比較各成分在兩種藥材不同部位的異同。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較蟬花和冬蟲夏草中主要核苷類成分的含量以及核苷類成分在兩種蟲草不同藥用部位的含量，初步探討了蟬花替代冬蟲夏草的可行性。
　　目前，只有《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)蟬花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了收載，且內(nèi)容只包括性狀、鑒別和檢查項(xiàng)。為對(duì)蟬花的質(zhì)量控制提供更可靠的手段，本文按照《中國(guó)藥典》2015年版的規(guī)范要求，從性狀、鑒別（薄層）、檢查（水分、總灰分、酸不溶性

4、灰分和浸出物）、特征圖譜、含量測(cè)定等方面完善了蟬花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　第一部分：基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的蟬花和冬蟲夏草中主要核苷類成分的比較
　　目的：建立HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定蟬花和冬蟲夏草中13中核苷類成分的含量，并同時(shí)比較同一藥材不同藥用部位的核苷類含量差異。
　　方法：采用COSMOSIL Packed Column5C18-PAQ(4.6×250 mm,5μm)色譜柱，以甲醇-0.05％甲酸水為流動(dòng)相，梯度洗

5、脫，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量20μL，柱溫40℃。質(zhì)譜檢測(cè)采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，ESI源，正離子模式。源噴射電壓（IS）為5500 V；霧化溫度為650℃；霧化氣（GS1，N2）：4.14×105 Pa；輔助氣（GS2，N2）：4.48×105 Pa；氣簾氣（N2）：1.72×105 Pa。應(yīng)用Analyst Software1.6.2軟件進(jìn)行定量分析數(shù)據(jù)的處理。
　　結(jié)果：13種核苷類成分的峰面積與濃度在測(cè)定濃

6、度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2≥0.9990。方法的精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性、檢測(cè)限和定量限均符合要求，平均加樣回收率為95.9-103.4%。樣品測(cè)定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的蟬花和冬蟲夏草中13種核苷類成分的相對(duì)含量和絕對(duì)含量差別很大，并且冬蟲夏草中13種核苷類成分的總含量明顯高于蟬花，但兩種藥材中的含量最高的成分均為尿苷。通過(guò)比較兩種蟲草不同藥用部位即幼蟲和子實(shí)體中13種成分的總含量發(fā)現(xiàn)，無(wú)論在蟬花還是冬蟲夏草中都是子實(shí)體中的含量大于

7、幼蟲中的含量。
　　結(jié)論：首次建立了簡(jiǎn)便、靈敏度高、專屬性強(qiáng)的HPLC-MS/MS法，用于同時(shí)測(cè)定蟬花和冬蟲夏草中13種核苷類成分的含量，并比較了兩種蟲草不同藥用部位中核苷類成分含量差異，為蟬花替代冬蟲夏草的可行性提供了一定的理論基礎(chǔ)。
　　第二部分：蟬花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　目的：建立蟬花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為不同來(lái)源蟬花藥材的全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　方法：通過(guò)查閱文獻(xiàn)對(duì)蟬花進(jìn)行本草考證；依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部

8、通則，并參考《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)10批蟬花進(jìn)行性狀、鑒別（薄層色譜鑒別）、檢查（水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物）、特征圖譜和含量測(cè)定等方法的建立。
　　結(jié)果：1.確定了蟬花的基源和性狀。2.鑒別：薄層色譜鑒別可見5個(gè)顯色清晰的主斑點(diǎn)，分離度達(dá)到要求，并且該分離條件受溫度和濕度影響較小。3.檢查：水分測(cè)定結(jié)果為6.1%~11.6%；總灰分測(cè)定結(jié)果為5.5%~15.5%；酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果為2.0%~10.5%；浸出物測(cè)

9、定結(jié)果為39.4%~45.6%。4.特征圖譜：建立了蟬花的特征圖譜。5.含量測(cè)定：尿苷的質(zhì)量濃度在2.68~16.13μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.833X-0.084（R2=0.9999），加樣回收率為98.30%~101.4%，尿苷的含量范圍為0.095%~0.172%。
　　結(jié)論：建立了專屬性和耐用性良好的薄層色譜鑒別方法；制定了水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物的限度；建立了簡(jiǎn)便、穩(wěn)定的特征