紅花注射液生物活性成分及質量標準研究.pdf

1、紅花注射液由紅花Carthamus tinctoriusL.經(jīng)水煮醇沉等工藝加工而成,具有活血化瘀的功效,主要用于治療冠心病、脈管炎、閉塞性心腦血管疾病,臨床療效顯著。目前對紅花注射液的研究多集中于藥理、毒理及臨床方向,活性成分研究主要針對羥基紅花黃色素A,其它物質基礎研究薄弱。本課題組前期研究表明:總黃酮與紅花黃色素類為紅花注射液中主要活性成分,其它成分未見活性研究報道,因此有必要對相應活性成分進一步深入研究。
　　結合前期研究

2、結果,采用多種分離分析方法(聚酰胺、Sephadex LH-20、ODS、HPLC和 LC-MSn等)并結合相關的藥理模型,對紅花注射液中黃酮等化學成分進行了較為系統(tǒng)的研究,初步闡明了其中的抗血小板聚集活性成分。醌式查爾酮類成分活性好,但含量較低、穩(wěn)定性較差、不易分離,我們建立了該類成分的指紋圖譜,以便更好地控制紅花注射液的產(chǎn)品質量,并對其中4個特征色譜峰進行了指認。依據(jù)體外抗ADP誘導血小板聚集活性結果,建立了同時測定紅花注射液中3種

3、活性成分含量的方法。具體研究內(nèi)容如下:
　　1.對紅花注射液進行了分離純化,從中分離得到16個化合物,經(jīng)核磁、質譜等譜學方法鑒定其結構分別為:野黃芩苷(1)、山柰酚-3-O-β-蕓香糖苷(2)、羥基紅花黃色素 A(3)、蘆丁(4)、香豆酸(5)、腺苷(6)、紫丁香苷(7)、(3E)-4-(4'-羥基苯基)丁-3-烯-2-酮(8)、(8Z)-癸烯-4,6-二炔-1-O-葡萄糖苷(9)、對羥基苯甲醛(10)、(2E,8E)-十四烯-4

4、,6-二炔-1,12,14-三羥基-1-O-葡萄糖苷(11)、山柰酚-3-O-β-槐糖苷(12)、尿苷(13)、二氫紅花菜豆酸(14)、肉桂酸(15)和山柰酚(16)?；衔?,2,7,9,11,12均為首次從紅花注射液中分到。
　　2.體外家兔抗ADP誘導血小板聚集活性測試結果表明,除了化合物5外,其它化合物均表現(xiàn)出不同程度的抗血小板聚集活性,尤其是化合物2,3,9,12均與紅花注射液抗血小板聚集活性測定結果相近。
　　3

5、.基于紅花注射液現(xiàn)行質量標準,我們通過對紅花注射液進行前處理,采用H PLC-UV法分離,將紅花注射液色譜圖導入到國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜評價系統(tǒng)》軟件(2010年版)中,進行色譜峰匹配,建立了紅花注射液中醌式查爾酮類成分指紋圖譜,圖譜中顯示13個共有峰,通過液質聯(lián)用在線分析,確定了4個化合物的結構并進行了裂解途徑的推測。同一廠家的9批紅花注射液指紋圖譜分析結果表明,各批次紅花注射液中醌式查爾酮類成分無論是種類還是含量均沒有顯著

6、差異,這表明紅花注射液生產(chǎn)工藝相對穩(wěn)定。所建立的指紋圖譜可以初步了解紅花注射液中醌式查爾酮類成分組成情況,可以作為檢測紅花注射液質量的一種方法。
　　4.分離得到的單體化合物抗血小板聚集活性結果表明,(8Z)-癸烯-4,6-二炔-1-O-葡萄糖苷(9)與紫丁香苷(7)活性較好,而且含量高。在現(xiàn)有質量標準中,僅對羥基紅花黃色素A單一指標進行含量測定,在此基礎上,采用HPLC-UV建立了同時測定紅花注射液中羥基紅花黃色素 A、紫丁香苷