17-β雌二醇通過雌激素受體α抑制肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖.pdf

1、目的：觀察17-β雌二醇（E2）對低氧誘導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖（hPASMCs）的影響，并探討雌激素受體(estrogen receptor,ER)在其中的介導(dǎo)作用。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：常氧組hPASMCs置于37℃、5％CO2、95%氧氣的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，低氧組hPASMCs置于37℃、5%CO2、92%N2的三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2d換液1次，并以0.25%胰蛋白酶進(jìn)行消化傳代，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞為第5~8代，

2、均處于對數(shù)生長期。實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞均在不含F(xiàn)BS的無酚紅DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h進(jìn)行同步化。
　　2.細(xì)胞干預(yù)：應(yīng)用第5~8代hPASMCs，分為常氧組、低氧組、低氧+E2(10-6mol/L)組、低氧+E2(10-7mol/L)組、低氧+E2(10-8mol/L)組、低氧+E2(10-9mol/L)組，行MTT實(shí)驗(yàn)測定不同干預(yù)條件下細(xì)胞增殖情況，篩選最適E2干預(yù)濃度。其次，將細(xì)胞分為常氧組、低氧組、低氧+E2(10-6mol/L)

3、、低氧+E2(10-6mol/L)+MPP組、低氧+E2(10-6mol/L)+PHTPP組，行MTT實(shí)驗(yàn)測定各組細(xì)胞增殖情況，并采用RT-PCR法測定不同組hPASMCs中ERα、ERβ及PCNA的mRNA表達(dá)水平，采用Western blot法測定不同組hPASMCs中ERα、ERβ及PCNA的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　慢性低氧可顯著刺激hPASMCs增殖（P<0.01），應(yīng)用E2干預(yù)后hPASMCs增殖減少（P<

4、0.01），且最佳抑制濃度為10-6mol/l。另外，慢性低氧誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的同時(shí)伴隨ERαmRNA及蛋白表達(dá)下降（P<0.01）， PCNAmRNA及蛋白表達(dá)升高（P<0.01），而ERβmRNA及蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05）；應(yīng)用E2干預(yù)后，抑制了細(xì)胞的增殖并逆轉(zhuǎn)了ERα、PCNA指標(biāo)的以上變化（P<0.01），但對ERβ表達(dá)無明顯影響（P＞0.05）。在低氧+E2基礎(chǔ)上，應(yīng)用MPP后可顯著削弱E2的以上作用（P<0.01），而