AMPK抑制冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)理研究.pdf

1、[目的]血管平滑肌細(xì)胞的增殖在動(dòng)脈粥樣硬化以及血管成形術(shù)后再狹窄的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起了至關(guān)重要的作用。有大量的研究證實(shí)，體外培養(yǎng)的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞是一個(gè)適合用于研究冠狀動(dòng)脈血管疾病及其相關(guān)機(jī)制的模型。磷酸腺苷激活的蛋白激酶(Adenosine monophosplate-activated protein Kinase，AMPK)是一種重要的蛋白激酶，能感受到細(xì)胞內(nèi)AMP的濃度以及AMP/ATP比值上的變化，在真核生物細(xì)胞中，是

2、細(xì)胞應(yīng)對(duì)低能量狀態(tài)的主要調(diào)節(jié)器。我們以原代分離培養(yǎng)的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(Porcine coronary arterysmooth muscle cells，PCASMCs)和豬冠狀動(dòng)脈組織為模型，并輔以小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎模型，探討AMPK的激活是否影響血管平滑肌細(xì)胞尤其是冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的功能和增殖，以期為AMPK作為抑制冠狀動(dòng)脈增殖性疾病的靶點(diǎn)提供有效數(shù)據(jù)。
　　 [方法]AICAR(5-Aminoimidazole-

3、4-carboxamide-l-J3-D-ribofuranoside)是AMPK的激活劑，用其處理體外分離培養(yǎng)的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞，通過(guò)WST-1和細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)平滑肌細(xì)胞的增殖。之后，通過(guò)western blot檢測(cè)AMPK的磷酸化水平及p44/42 MAPK的磷酸化水平。以及其下游的p27、PCNA等的表達(dá)。通過(guò)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白easpase-3的表達(dá)，檢測(cè)AICAR處理的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞是否出現(xiàn)凋亡。與此同時(shí)，通過(guò)m

4、yography血管功能實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AICAR對(duì)豬冠狀動(dòng)脈收縮、舒張功能的影響，以及AICAR對(duì)小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎后結(jié)扎位點(diǎn)新生內(nèi)膜形成的影響。
　　 [結(jié)果]AICAR激活的AMPK處理后能夠明顯的抑制血清誘導(dǎo)的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的增殖，并且這種抑制作用是劑量依賴的。AICAR處理的豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞，其AMPK磷酸化水平明顯升高，且p44/42 MAPK磷酸化水平受到明顯的抑制，但AMPK通路相關(guān)的p27、PCNA等蛋

5、白表達(dá)量沒(méi)有明顯的差異，且凋亡相關(guān)蛋白caspase-3也并未檢測(cè)到發(fā)生剪切，說(shuō)明AICAR不會(huì)導(dǎo)致豬冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的凋亡。且其可能是通過(guò)抑制p44/42 MAPK的磷酸化來(lái)抑制細(xì)胞增殖的。myography血管功能實(shí)驗(yàn)顯示AICAR抑制Ach誘導(dǎo)的豬冠狀動(dòng)脈血管收縮；并且AICAR能引起Ach誘導(dǎo)的收縮后的血管舒張。而AICAR處理3周的小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎模型，其新生內(nèi)膜的形成受到明顯的抑制。
　　 [結(jié)論]1.AMPK