替米沙坦對(duì)長(zhǎng)期HSHF膳食喂養(yǎng)大鼠肝臟巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的影響.pdf

1、目的：
　　1.觀察替米沙坦對(duì)長(zhǎng)期高糖高脂（high sugar and high fat,HSHF）膳食喂養(yǎng)大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰島素（fasting insulin,FINS）及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)的影響。
　　2.觀察替米沙坦對(duì)長(zhǎng)期HSHF膳食喂

2、養(yǎng)大鼠肝臟病理形態(tài)及其內(nèi)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的影響，探討替米沙坦改善長(zhǎng)期HSHF喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗的機(jī)制。
　　方法：
　　將購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的6-8周齡健康雄性 SD（Sprague Dawley）大鼠30只適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分成兩組：對(duì)照組10只，高糖高脂組20只。對(duì)照組飼以山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的普通飼料；高糖高脂組飼以課題組多項(xiàng)研究已經(jīng)使用過(guò)的高糖高脂飼料，飼料配方如下：70％普通飼料（面料，

3、由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）+20%豬油+10%蔗糖+1%膽固醇+0.25%膽酸。兩組大鼠均在天黑前投食并自由飲水。飼養(yǎng)至第6個(gè)月時(shí)將HSHF組中存活的20只再隨機(jī)分為2個(gè)亞組：HSHF組10只，替米沙坦組10只。HSHF組繼續(xù)用上述高糖高脂飲食喂養(yǎng)；替米沙坦組接受上述高糖高脂飲食喂養(yǎng)的同時(shí)予以替米沙坦5mg/kg.d灌胃。將對(duì)照組、HSHF組、替米沙坦組繼續(xù)喂養(yǎng)3個(gè)月后，三組分別存活9只、8只、9只，隨機(jī)選取三組中存活大鼠各6只，

4、禁食8-12小時(shí)后測(cè)定大鼠體重，經(jīng)腹腔注射烏拉坦（4ml/kg）麻醉，待大鼠麻醉后打開(kāi)腹腔，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，將血漿離心（3000r/min15min）分離出血清并分裝于無(wú)菌EP管內(nèi)，標(biāo)本暫凍存于-70℃冰箱，統(tǒng)一測(cè)FPG、FINS并計(jì)算HOMA-IR(HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(μIU/mL)/22.5）。于無(wú)菌條件下摘取大鼠相同的兩葉肝臟，其中一葉統(tǒng)一用10%中性甲醛固定做石蠟切片，后期經(jīng)蘇木精一伊紅（HE）染色

5、觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)變化；另一葉用錫箔紙包裝標(biāo)記并快速投放于液氮中，Western Blot法檢測(cè)肝臟中M1型巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iducible nitric oxide synthase,iNOS）和M2型巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組相比，HSHF組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

6、＜0.05）；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.與對(duì)照組相比，HSHF組大鼠肝組織HE染色結(jié)果均可見(jiàn)彌漫性的脂肪變性，細(xì)胞核位于邊緣，細(xì)胞多呈空泡狀，體積顯著增大，胞漿內(nèi)可見(jiàn)中、大泡性的脂滴沉積，氣球樣變多見(jiàn)，胞質(zhì)疏松，肝小葉和匯管區(qū)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，點(diǎn)狀壞死灶明顯；與HSHF組相比，替米沙坦組肝組織HE染色結(jié)果可見(jiàn)肝細(xì)胞體積減小，脂滴體積變小

7、，以小、中泡性的脂滴為主，氣球樣變及小葉內(nèi)炎癥均明顯改善。
　　3.與對(duì)照組相比，HSHF組大鼠肝臟iNOS蛋白表達(dá)水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠iNOS蛋白表達(dá)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.與對(duì)照組相比，HSHF組大鼠肝臟Arg-1蛋白表達(dá)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠Arg-1蛋白表達(dá)水