膳食補(bǔ)充亮氨酸及限食對(duì)高脂膳食喂養(yǎng)大鼠胰島功能的影響.pdf

1、目的：
　　為了使大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，用高脂膳食誘導(dǎo)大鼠，檢測(cè)亮氨酸及限食對(duì)其機(jī)體代謝，胰島素敏感性，氧化應(yīng)激水平和胰腺中相關(guān)基因表達(dá)的影響，以探討亮氨酸及限食對(duì)其胰島功能的作用及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　大鼠60只隨機(jī)分為5組，分別給予基礎(chǔ)飼料（normal diet，ND）、高脂飼料（high fat diet,HFD）、高脂飼料+限食（ND+CR）、高脂飼料+亮氨酸（ND+Leu）、高脂飼料+亮氨酸+限食

2、（ND+Leu+CR）喂養(yǎng)36周，基礎(chǔ)飼料組（ND）作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，進(jìn)行胰島素耐量實(shí)驗(yàn)（Insulin Tolerance Testing,ITT）、葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（Glucose Tolerance Testing,GTT），計(jì)算曲線下面積（Area under curve,AUC）。動(dòng)物處死，作胰腺HE染色，測(cè)定血清胰島素、葡萄糖水平，計(jì)算胰島素敏感系數(shù)（HOMA-IR）。測(cè)定血清丙二醛（malondialdehyde,MD

3、A）水平、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real time-PCR）法檢測(cè)胰腺中胰島素分泌相關(guān)基因谷氨酸鹽脫氫酶（glutamate dehydrogenase,GDH）、ATP合成酶β亞單位（ATP synthaseβsubunit,ATPsyn-β）及線粒體合成相關(guān)基因：核呼吸因子1（nu

4、clear respiratory factor1,NRF-1）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α（peroxisome proliferators-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）、去乙?；鞍?（sirtuin1, SIRT1）、線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（mitochondrial transcription factor A,TFAM）mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

5、　　1.大鼠代謝改變：
　?。?）體重：HFD組從第5周之后顯著比ND組高，從第13周后，HFD組高于HFD+Leu組，從第15周之后，HFD+CR組顯著高于HFD+Leu+CR組，P<0.05，差異顯著。
　?。?）進(jìn)食量：HFD組進(jìn)食量從第2周之后顯著比ND組低（P<0.05）。HFD+Leu組在3-4周，25-32周顯著比HFD組低，HFD+Leu+CR組從第3周之后顯著低于HFD+CR組（P<0.05），差異顯著。<

6、br>　?。?）每日能量攝入量：HFD組從第3周后高于ND組（P<0.05），HFD+Leu組在3-4周，25-32周時(shí)低于HFD組（P<0.05），HFD+Leu+CR組從第3周之后低于HFD+CR組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）臟體比：HFD組睪丸系數(shù)，肝臟系數(shù)及腎周脂肪系數(shù)比ND組高，P<0.05。HFD組睪丸，腎臟，肝臟，脂肪系數(shù)顯著高于HFD+CR組及HFD+Leu+CR組，P<0.05。HFD+Leu

7、組睪丸，腎臟，脂肪系數(shù)均顯著高于HFD+Leu+CR組，P<0.05。
　　2.胰島素敏感性改變
　?。?）空腹血糖：HFD組顯著比ND組、HFD+CR組及HFD+Leu+CR組高，HFD+Leu+CR組顯著比HFD+Leu組低，P<0.05。HFD組的HOMA-IR顯著比ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR組高。
　?。?）ITT：注射胰島素后，各時(shí)間點(diǎn)HFD組的血糖水平及AUC顯著比ND組、H

8、FD+CR組以及HFD+Leu+CR組高，P<0.05。各時(shí)間點(diǎn)HFD+Leu組血糖值及AUC顯著比HFD+Leu+CR組高，P<0.05。
　　（3）GTT：給予葡萄糖后，各時(shí)間點(diǎn)HFD組動(dòng)物的血糖值顯著比ND組及HFD+Leu+CR組高，60和120min時(shí)HFD組的血糖水平顯著比HFD+Leu組及HFD+CR組高，P<0.05。HFD組AUC顯著高于ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR組，P<0.05。

9、
　　3.大鼠胰腺形態(tài)改變
　　ND組胰腺內(nèi)外部分分界清楚，胰島細(xì)胞規(guī)則成團(tuán)存在。HFD組胰腺外分泌腺含大量脂滴，外分泌腺泡細(xì)胞肥大，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，含鐵血黃素沉積，胰島萎縮，纖維組織增生。HFD+CR組胰島較為完整，存在少量含鐵血黃素。HFD+Leu大鼠胰腺胰島與外分泌腺邊界不清，外分泌腺有少量脂滴，外分泌腺泡細(xì)胞較肥大，含鐵血黃素沉積，胰島內(nèi)纖維組織增生。HFD+Leu+CR組胰腺內(nèi)外部分邊界清楚，胰島完整，細(xì)胞分布規(guī)則。

10、
　　4.血清氧化、抗氧化指標(biāo)
　　HFD組血清MDA水平顯著比ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR高，HFD+Leu+CR組血清MDA水平比HFD+Leu組低，P<0.05。HFD組血清SOD活力顯著比ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR組低，HFD+Leu組及HFD+CR組血清SOD活力顯著低于HFD+Leu+CR組，P<0.05。各組GSH-Px活力的比較結(jié)果與SOD類似。<

11、br>　　5.大鼠胰腺相關(guān)基因mRNA表達(dá)
　　（1）大鼠胰腺GDH表達(dá)水平：與ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR組相比，HFD組GDH表達(dá)水平顯著降低，HFD+Leu+CR組顯著比HFD+CR組及HFD+Leu組高，P<0.05。
　　（2）大鼠胰腺ATP syn-β表達(dá)水平：HFD組ATPsyn-β表達(dá)水平顯著比ND組及HFD+CR組高，HFD+Leu組顯著比HFD組高，HFD+Leu+CR組顯著

12、高于HFD+CR組，P<0.05。
　?。?）大鼠胰腺線粒體的生成基因表達(dá)水平：HFD組大鼠胰腺NRF-1、SIRT1、PGC-1α、TFAM表達(dá)水平顯著比ND組、HFD+Leu、HFD+CR及HFD+Leu+CR組低，HFD+Leu+CR組胰腺SIRT1、NRF-1、TFAM表達(dá)水平顯著比HFD+CR組高，HFD+Leu+CR組胰腺SIRT1、TFAM表達(dá)水平顯著高于HFD+Leu組，P<0.05。
　　結(jié)論：