替米沙坦對(duì)兔心肌缺血-再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：⑴探討替米沙坦預(yù)處理對(duì)兔心肌I/R AT1R、AT2R及IKK-β的影響。⑵探討替米沙坦預(yù)處理對(duì)兔心肌I/R微循環(huán)障礙的影響。⑶探討替米沙坦預(yù)處理對(duì)兔心肌I/R損傷的影響。 方法： 30只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組，分別為假手術(shù)組、心肌I/R模型組、替米沙坦防治組，每組10只。假手術(shù)組、模型組每日5mL生理鹽水灌胃1次，防治組每只兔子予替米沙坦每天5mg/kg，溶于5mL，生理鹽水，每天1次灌胃，共兩周。假手術(shù)組左冠狀動(dòng)

2、脈前降支近端穿線但不結(jié)扎，觀察7h，其余二組則結(jié)扎1h后，松開結(jié)扎線，予6h再灌注。取頸動(dòng)脈血放免法測(cè)定結(jié)扎前、結(jié)扎后1h、再灌注30min、再灌注3h、再灌注6h血漿腎素活性(RA)、Ang II水平。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死動(dòng)物，取再灌注區(qū)心肌組織，制備勻漿液，放免法測(cè)定RA、Ang II含量。從再灌注區(qū)取下組織作標(biāo)本，予常規(guī)組織學(xué)處理，應(yīng)用免疫組化法測(cè)定AT1R、AT2R、IKK-β蛋白質(zhì)表達(dá)。⑵30只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組，動(dòng)物模型制

3、備、分組及納入例數(shù)均與第一部分相同。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死動(dòng)物，從再灌注區(qū)取下組織作標(biāo)本，予常規(guī)組織學(xué)處理。組織HE染色后，光鏡下觀察微血管結(jié)構(gòu)，計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞數(shù)。免疫組化法白細(xì)胞分化抗原34(CD34)標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，病理圖象分析儀分析計(jì)算微血管截面積。透射電鏡觀察心肌毛細(xì)血管超微結(jié)構(gòu)。⑶30只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組，動(dòng)物模型制備、分組及納入例數(shù)均與第一部分相同。在心肌缺血和再灌注狀態(tài)下觀察血流動(dòng)力學(xué)變化，動(dòng)態(tài)觀察心率(HR)、左室舒張

4、末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓上升最大速率(+dp/d tmax)、左室內(nèi)壓下降最大速率(-dp/d tmax)，并在以下時(shí)段重復(fù)測(cè)量：結(jié)扎前，結(jié)扎后1h，再灌注30min、2、3 h。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死動(dòng)物，TTC染色后，圖像分析軟件測(cè)定心肌梗死面積，從再灌注區(qū)取下組織作標(biāo)本，予常規(guī)組織學(xué)處理。組織HE染色后，光鏡下分析心肌組織病理損傷程度。透射電鏡觀察凋亡心肌細(xì)胞。應(yīng)用TUNEL技術(shù)標(biāo)記缺血區(qū)凋亡心肌細(xì)胞，計(jì)算心肌組織中細(xì)胞凋亡率。

5、 結(jié)果：⑴模型制作過程中假手術(shù)組因麻醉意外、手術(shù)意外死亡2只；模型組因手術(shù)意外、出現(xiàn)室顫死亡2只，因數(shù)據(jù)不完整剔除1只；防治組因手術(shù)意外、出現(xiàn)室顫死亡2只，以上所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均不納入研究。最后納入研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共23只，其中假手術(shù)組8只、模型組7只、防治組8只。與假手術(shù)組比較，模型組和防治組血漿RA、Ang II水平在結(jié)扎后1h、再灌注30min、再灌注3h、再灌注6h明顯增高，均有顯著性差異(P<0.01)；防治組在結(jié)扎后1h、再灌注3

6、0min、再灌注3h、再灌注6h血漿RA、Ang II水平與模型組比較，均無顯著性差異(P>0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組和防治組再灌注6h心肌組織RA、Ang II含量增高，均有顯著性差異(P<0.01)；防治組再灌注6h心肌組織RA、Ang II含量與模型組比較，均無顯著性差異(P>0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織AT2R蛋白表達(dá)明顯減少(P<0.01)，防治組心肌組織AT2R蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組及模型組(P<0.01

7、)。與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織IKK-β蛋白表達(dá)明顯增高(P<0.01)，防治組心肌組織IKK-β蛋白表達(dá)較模型組減少，高于假手術(shù)組(P<0.01)。三組間心肌組織AT1R蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。⑵HE染色，光鏡下觀察微血管示：假手術(shù)組：微動(dòng)(靜)脈完整，管腔內(nèi)未見中性粒細(xì)胞：模型組：微動(dòng)(靜)脈內(nèi)見大量中性粒細(xì)胞與血小板、內(nèi)皮細(xì)胞異常黏附聚集，堵塞管腔；防治組：微動(dòng)(靜)脈內(nèi)見少量中性粒細(xì)胞黏附。與假手術(shù)組相比，模型

8、組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增高(P<0.01)，防治組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)較模型組減少(P<0.01)。與假手術(shù)組相比，模型組微動(dòng)脈、微靜脈和毛細(xì)血管截面積均明顯降低(P<0.01)，防治組微動(dòng)脈、微靜脈和毛細(xì)血管截面積均較模型組增高(P<0.05)，電鏡示：假手術(shù)組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，管腔通暢：模型組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，中性粒細(xì)胞堵塞管腔；防治組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹減輕，毛細(xì)血管腔內(nèi)中性粒細(xì)胞顯著減少，無堵塞現(xiàn)象。⑶與假手術(shù)組相比，模

9、型組和防治組結(jié)扎后1h、再灌注30min、再灌注2h、再灌注3h HR、+dp/d tmax、-dp/d tmax均明顯降低，LVEDP明顯升高，均有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，防治組HR在再灌注3h明顯改善，+dp/d tmax在再灌注2h、3h明顯改善，-dp/d tmax、LVEDP在再灌注30min、3h明顯改善(P<0.05)。與模型組比較，防治組心肌梗死面積明顯縮小，心肌細(xì)胞凋亡率降低，心肌組織病理損傷程度明顯

10、減輕(P<0.01)。電鏡顯示，替米沙坦抑制心肌I/R誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的特征性形態(tài)學(xué)改變?nèi)缂?xì)胞萎縮，核染色質(zhì)濃縮邊集，出現(xiàn)凋亡小體等。 結(jié)論：⑴兔心肌I/R過程中RAS激活，血漿及心肌組織RA、Ang II明顯升高，升高的Ang II作用于AT1R，可以增加IKK-β的激活，下調(diào)AT2R表達(dá)，替米沙坦預(yù)處理抑制IKK-β激活，上調(diào)AT2R表達(dá)。⑵替米沙坦預(yù)處理通過減輕中性粒細(xì)胞黏附聚集，擴(kuò)張微血管，緩解血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，抑制兔