GSTA1對結腸癌細胞增殖和凋亡的影響研究.pdf

1、東北農業(yè)大學博士學位論文GSTA1對結腸癌細胞增殖和凋亡的影響研究姓名：李蕊申請學位級別：博士專業(yè)：獸醫(yī)學；基礎獸醫(yī)學指導教師：張秀英20120608東北農業(yè)大學農學博士學位論文對Caco2和HT29細胞不同生長時期GSTAl表達及活性檢測的結果表明，Caeo2細胞中GSTAl蛋白、mRNA表達與活性隨著細胞的匯合程度逐漸升高。與匯合前期相比較，匯合期GSTAl蛋白、mRNA及酶活性分別升高了1888、3018和1994倍(PO05)。

2、神經酰胺處理后，3個組細胞存活率均降低，但各組間并無統(tǒng)計學差異(PO05)。對照組、siRNA轉染組和陰性對照組均無激活型caSp勰e3蛋白表達，神經酰胺處理后，3個組的c嬲paSe3蛋白也均未被激活。雙酶切和序列測定表明本試驗成功構建了重組真核表達載體GSTAlpcDNA31／V5HisTOPO并將其瞬時轉染至HT29細胞中。采用westernblotting方法確定轉染劑Lipofectamine2000為31xl／mL、3昭質粒、

3、轉染48h為最佳的質粒轉染條件。在此基礎上研究GSTAl過表達對神經酰胺介導的HT29細胞增殖和凋亡的影響。結果表明，對照組、質粒轉染組和陰性對照組細胞存活率差異不顯著(P005)，神經酰胺處理后，3個組細胞存活率均降低，但各組間并無統(tǒng)計學差異(P005)。對照組、質粒轉染組和陰性對照組均無激活型easpaSe3蛋白表達，神經酰胺處理后，3個組的激活型caSpaSe3蛋白表達均增加，但各組間差異不顯著(P005)。外源性C2神經酰胺可顯

4、著抑制Caco2和HT29結腸癌細胞的增殖，不能誘導Caco2凋亡，但可誘導HT29凋亡。Caco一2細胞中GSTAI蛋白、mRNA表達量與活性隨細胞匯合程度逐漸增加，而HT29細胞各生長時期中GSTAI表達量極低或不表達。外源性c2神經酰胺處理的Caco2細胞中GSTAl蛋白、mRNA表達量與活性顯著升高，而神經酰胺處理的HT29細胞仍然檢測不到GSTAl的表達。基因轉染試驗證實了GSTAl的沉默或過表達對神經酰胺介導的結腸癌細胞增殖