組蛋白去乙?；冈谙∈髿獾赖谋磉_(dá)及維生素D和地塞米松對其影響的研究.pdf

1、目的：組蛋白去乙?；福℉DAC）是一類廣泛存在于真核細(xì)胞中的蛋白酶，通過使組蛋白去乙?；鴮虻谋磉_(dá)調(diào)控起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者中，HDAC的活性是降低的，隨著乙?；潭鹊纳?，炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)亦會(huì)增加；而近來發(fā)現(xiàn)維生素D3不僅參與礦物質(zhì)代謝，在免疫方面也起了作用。研究發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2 D3的缺乏可能會(huì)影響哮喘的發(fā)病機(jī)制，然而它在調(diào)節(jié)特定分子的轉(zhuǎn)錄機(jī)制方面尚不清楚。目前，地塞米松和1,25(OH)2 D3在哮喘中對氣道H

2、DAC表達(dá)的影響尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制OVA哮喘小鼠模型，并使用地塞米松（Dex）和1,25(OH)2 D3進(jìn)行干預(yù)，來觀察其對哮喘小鼠氣道HDAC2表達(dá)和活性的影響，以及它與地塞米松（Dex）在抑制氣道炎癥細(xì)胞因子分泌方面是否有協(xié)同作用。
　　方法：50只約20-45g的雌性Balb/c小鼠，隨機(jī)編為1-50號：對照組（N組）為1-10號、OVA哮喘組（M組）為11-20號、維生素D組（V組）為21-30號、Dex組（D組）

3、為31-40號、維生素D+Dex組（DV組）為41-50號。各組小鼠分別在第3天、第10天的同一時(shí)間接受腹腔注射致敏，第22天開始至26天連續(xù)5天進(jìn)行滴鼻激發(fā)。其中維生素D治療組小鼠于每次激發(fā)前30min予以1,25(OH)2 D3（0.25ug/kg）腹腔注射治療；D組小鼠在每次激發(fā)前30min，予以地塞米松磷酸鈉（1mg/kg）腹腔注射治療；DV組于每次激發(fā)前30min予以1,25(OH)2 D3（0.25ug/kg）、地塞米松磷酸

4、鈉（1mg/Kg）腹腔注射治療，對照組采用等容量的PBS腹腔注射及激發(fā)，末次激發(fā)24小時(shí)后處死小鼠；取病變肺組織行HE染色，支氣管肺泡灌洗液（BALF）作細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，造模成功后采用眶靜脈取血用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測血清中IL-4水平；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測肺組織中NF-KBp65表達(dá)情況；用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測HDAC2含量。
　　結(jié)果：
　　1、N組小鼠好動(dòng)，精神食欲佳

5、，HE染色肺組織層結(jié)構(gòu)清晰，杯狀細(xì)胞散在且少，氣道、血管及周圍肺組織極少見到炎性細(xì)胞浸潤；OVA組小鼠可見不同程度精神、食欲下降，毛發(fā)臟亂，激發(fā)后可見到明顯呼吸困難、噴嚏、嘴唇爪紫紺，有的可見二便失禁，HE染色可見肺組織結(jié)構(gòu)破壞，有大量的炎性細(xì)胞，氣道內(nèi)可見脫落的壞死細(xì)胞，氣道粘膜增厚，有的可見管腔塌陷；地塞米松治療組和1,25（OH）2D3治療組可見肺組織各層結(jié)構(gòu)清晰，浸潤的炎癥細(xì)胞減少，平滑肌變薄。
　　2、M組與N相比，BA

6、LF中嗜酸性粒細(xì)胞百分比升高（P<0.05）；小鼠血清IL-4含量升高（P<0.05）；而維生素D和地塞米松干預(yù)組動(dòng)物BALF中白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量明顯低于哮喘組（均P<0.05），小鼠血清IL-4含量明顯降低（P<0.05）；DV組分別與D組、V組相比，BALF中嗜酸粒數(shù)量減低（P<0.05），小鼠血清IL-4量也降低（P<0.05）。
　　3、NF-KB p65基因表達(dá)結(jié)果：M組小鼠NF-kB p65量明顯比對照組升高

7、（均P<0.05）；同M組相比，D、V、DV組NF-KB p65基因表達(dá)水平降低（均P<0.05）；與D組、V組相比，DV組NF-KB p65基因表達(dá)水平降低（P<0.05）。
　　4、Western blot檢測顯示：M組小鼠肺組織中HDAC2蛋白水平明顯比對照組小鼠降低（均P<0.05），而維生素D和地塞米松治療后HDAC水平顯著升高，地塞米松組較維生素D組水平更高（均P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、OVA誘

8、導(dǎo)哮喘小鼠肺組織NF-kB p65表達(dá)水平升高，HDAC2蛋白水平降低。
　　2、1,25(OH)2 D3能抑制哮喘小鼠肺組織中Th2型細(xì)胞因子的分泌，下調(diào)NF-kB p65mRNA水平，并能顯著增加HDAC2蛋白表達(dá)和酶活性。
　　3、1,25(OH)2 D3和地塞米松在抑制細(xì)胞因子釋放和NF-kB p65的表達(dá)，增加HDAC2的表達(dá)和活性方面具有協(xié)同效應(yīng)。
　　4、1,25(OH)2 D3可能成為一種治療哮喘的新型