Pendrin蛋白在哮喘小鼠氣道的表達及地塞米松和吡格列酮對其影響的研究.pdf

1、目的:Pendrin蛋白是由PDS基因編碼的陰離子交換轉(zhuǎn)運體，主要功能是轉(zhuǎn)運碘離子，氯離子，碳酸氫根等多種離子。研究發(fā)現(xiàn)pendrin蛋白在哮喘的發(fā)病機制中起著一定的作用，特別是和MUC5AC為主的氣道粘液高分泌關(guān)系密切;而過氧化物酶增殖激活受體激動劑吡格列酮具有顯著的免疫調(diào)節(jié)和廣泛的抗炎作用。目前，地塞米松和吡格列酮在支氣管哮喘中對氣道pendrin蛋白表達的影響尚未見報道，因此本實驗通過復(fù)制OVA哮喘小鼠模型，并使用地塞米松和吡格列

2、酮進行干預(yù)，觀察哮喘小鼠氣道pendrin蛋白和MUC5AC的表達，探討兩種藥物對pendrin蛋白表達的影響。
　　方法:4-6周齡SPF級雌性Balb/c小鼠40只隨機分為4組:PBS對照組、OVA哮喘組、吡格列酮治療組和地塞米松治療組。小鼠分別于第1天和第8天接受腹腔注射致敏，第22天至29天進行滴鼻激發(fā)。其中吡格列酮治療組小鼠于每次激發(fā)前30min予吡格列酮灌胃治療，地塞米松組小鼠于每次激發(fā)前30min予地塞米松腹腔注射治

3、療，對照組全程同步作PBS對照處理，末次激發(fā)24小時后處死全部小鼠收取標本。利用HE染色作肺組織切片病理學(xué)檢查，支氣管肺泡灌洗液(BAL F)中細胞瑞氏吉姆薩染色作分類計數(shù)，使用ELISA法檢測血清中OVA特異性IgE和支氣管肺泡灌洗液上清中IL-4和IL-13濃度，免疫組織化學(xué)染色法檢測各組小鼠氣道pendrin蛋白和MUC5AC表達情況，實時熒光定量PCR法檢測肺組織中pendrin和MUC5AC的mRNA表達水平。
　　結(jié)果

4、:(1)HE染色結(jié)果:PBS對照組小鼠氣道上皮細胞排列整齊，杯狀細胞少，無明顯炎癥細胞浸潤。OVA組小鼠肺部可見大量炎細胞浸潤，上皮細胞壞死脫落，杯狀細胞增生，氣道內(nèi)可見黏液栓;地塞米松及吡格列酮治療后，浸潤的炎癥細胞明顯減少，杯狀細胞數(shù)量減少。(2) BAL F細胞分類計數(shù):哮喘組小鼠BAL F中白細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞數(shù)均顯著高于對照組（均P＜0.01），而地塞米松和吡格列酮干預(yù)組動物BAL F中的白細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞數(shù)量明顯低

5、于哮喘組（均P＜0.01）(3) OVA-sIgE水平:OVA組小鼠血清OVA-sIgE明顯比對照組升高(P＜0.01)，而經(jīng)地塞米松和吡格列酮干預(yù)的小鼠血清中OVA-sIgE比哮喘組顯著降低（均P＜0.01）。(4) BAL F中IL-4和IL-13濃度:與PBS組相比，哮喘組小鼠BAL F內(nèi)IL-4和IL-13明顯升高(均P＜0.01)，地塞米松治療后，IL-4和IL-13均降低（均P＜0.01），吡格列酮干預(yù)組IL-4和IL-13

6、也顯著低于OVA組（均P＜0.01），而高于地塞米松組（均P＜0.05）。(5)免疫組織化學(xué)顯示:PBS組小鼠氣道中可見少量pendrin和MUC5AC蛋白表達，OVA組小鼠氣道均可見大量陽性染色細胞，明顯多于PBS組，地塞米松組和吡格列酮組陽性染色均明顯少于OVA組。(6)qPCR檢測顯示:OVA組小鼠肺組織中pendrin和MUC5AC的mRNA量明顯比PBS對照組小鼠升高（均P＜0.01），而地塞米松和吡格列酮治療后水平明顯降低（

7、均P＜0.01），地塞米松組較吡格列酮組水平更低(P＜0.01)。
　　結(jié)論:(1) OVA誘導(dǎo)哮喘小鼠肺部pendrin和MUC5AC的蛋白及mRNA表達水平均同步升高，pendrin蛋白可能在哮喘小鼠氣道黏液高分泌的病理生理變化過程中起重要作用。(2)地塞米松及吡格列酮均能抑制哮喘小鼠肺組織中炎癥細胞的積聚和Th2型細胞因子的分泌，并能顯著下調(diào)pendrin蛋白，同時伴隨著MUC5AC蛋白的下調(diào)，抑制pendrin的表達可能是