護肝片對比格犬體內(nèi)他克莫司藥動學的影響及其四種有效成分同時測定.pdf

1、肝移植是目前解決終末期肝病的唯一有效手段。受者術(shù)后需常規(guī)服用他克莫司等免疫抑制劑來預防排斥反應。他克莫司為新型鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，因免疫抑制作用強大、不良反應較少而成為指南推薦的一線用藥。他克莫司治療窗窄，口服生物利用度個體差異大，需常規(guī)進行血藥濃度監(jiān)測。護肝片由柴胡、茵陳、板藍根、五味子、豬膽粉、綠豆六味中藥材組成，具有保肝、疏肝理氣、健脾消食、降低轉(zhuǎn)氨酶的作用。肝移植受者常合并服用護肝片，在進行他克莫司血藥濃度監(jiān)測及隨訪時我們發(fā)現(xiàn)，加

2、服護肝片后肝移植受者他克莫司穩(wěn)態(tài)谷濃度明顯升高。那么，護肝片與他克莫司是否存在藥物相互作用呢？由于肝移植受者用藥種類繁多，直接對肝移植受者進行研究存在其它成份的干擾以及倫理等方面的限制，因此本課題擬在比格犬體內(nèi)研究護肝片對他克莫司藥動學的影響，同時建立護肝片中多種成分同時測定方法，為進一步研究他克莫司對護肝片藥動學影響提供實驗依據(jù)，為臨床合理用藥提供參考。
　　第一部分護肝片對比格犬體內(nèi)他克莫司藥動學的影響
　　目的：

3、>　　研究合用護肝片對比格犬體內(nèi)他克莫司藥動學的影響，初步觀察兩藥是否存在藥物相互作用。
　　方法：
　　試驗分兩組，對照組（n=6）：單服他克莫司，試驗組（n=6）：他克莫司合用護肝片。采用自身前后對照試驗，每只比格犬口服給予1粒他克莫司，一周后同時給予1粒他克莫司和2片護肝片。給藥前禁食12 h，期間自由飲水。于給藥前（0 h）及給藥后0.167，0.333，0.5，0.667，0.833，1，1.5，2，3，4，6，8

4、，12，24 h于后肢小隱靜脈取血1 mL，置于2 mL EDTA K2抗凝管中，待測。采用化學發(fā)光微粒子免疫法測定他克莫司全血濃度。將不同采血點血藥濃度數(shù)據(jù)，采用DAS（2.1.1版）軟件進行處理，計算他克莫司的主要藥代動力學參數(shù)：藥-時曲線下面積AUC0-t和AUC0-∞、消除半衰期t1/2、達峰時間T max、達峰濃度C max、表觀分布容積V/F、清除率CL/F。應用SPSS21.0統(tǒng)計軟件處理兩組間他克莫司血藥濃度及藥動學參數(shù)

5、數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用配對t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　合用護肝片前后他克莫司的主要藥動學參數(shù)：AUC0-24h分別為（54.23±33.95）和（74.54±32.85）；t1/2分別為（13.84±9.05）和（8.71±4.49） h；T max分別為（0.72±0.40）和（0.86±0.37）h；C max分別為（17.17±7.80）和（22.93±8.10）

6、μg·L-1；CL/F分別為（2.22±1.67）和（1.42±0.67）L·h-1；V/F分別為（37.54±24.77）和（17.50±11.82）L。與單服他克莫司相比，合用護肝片后他克莫司的AUC0-24h和C max分別增加37.5％和34%，CL/F和V/F分別降低36%和53%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。t1/2變短， T max延遲，差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　護肝片能提

7、高比格犬體內(nèi)他克莫司全血血藥濃度和生物利用度，降低藥物清除率和表觀分布容積。
　　第二部分高效液相色譜波長切換法同時測定護肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量
　　目的：
　　建立同時測定護肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量的高效液相色譜法，以期為進一步研究他克莫司對護肝片藥動學影響提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。
　　方法：
　　護肝片除去包衣，研細，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲

8、醇25 mL，超聲提取30 min，過濾，注入色譜系統(tǒng)。采用ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），以0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）為流動相，梯度洗脫（0~5 min，B為13%；5~15 min，B為13%~55%；15~23 min，B為55%~62%；23~25 min，B為62%~70%；25~29 min，B為70%~75%；29~35 min，B為75%；35~35.10 min，B為7

9、5%~13%；35.10~45 min，B為13%），流速為1.0 mL·min-1，柱溫：35℃，檢測波長：0~6 min為327 nm；6~16 min為380 nm；16~45 min為250 nm，進樣量：10μL。
　　結(jié)果：
　　建立高效液相色譜波長切換法同時測定護肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量測定方法，綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素與其他成分分離良好，雜質(zhì)干擾少，分離度均大于

10、1.5。保留時間分別為4.02 min（4.35 min）、18.29 min、29.32 min和31.29 min。綠原酸標準曲線方程為Y=28.26330X+24.9888，r=0.99939（n=5），線性范圍為4~100μg·mL-1；五味子醇甲標準曲線方程為Y=21.21935X-8.43444，r=0.99994（n=5），線性范圍為4~100μg·mL-1；五味子甲素標準曲線方程為Y=20.07794X-2.83327，

11、r=0.99993（n=5），線性范圍為1~25μg·mL-1；五味子乙素標準曲線方程為Y=17.76046X-2.51254， r=0.99992（n=5），線性范圍為2~50μg·mL-1。綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的精密度試驗RSD值（n=6）分別為0.32%，0.58%，0.14%，0.12%；重復性試驗RSD值（n=6）分別為1.03%，0.82%，0.91%，0.53%；穩(wěn)定性試驗RSD值（n=6）分別為0.