四種中藥復(fù)方制劑對(duì)氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響.pdf

1、目的：建立抗血小板藥物氯吡格雷及其活性代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定方法，通過(guò)比較合用四種中藥復(fù)方制劑（溶栓膠囊、血脂康膠囊、心元膠囊和松齡血脈康膠囊）前后大鼠體內(nèi)氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物（以其衍生物表示）藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的變化，探討四種中藥復(fù)方制劑對(duì)氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)是否有影響。
　　方法：
　　色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈：1mmol/L乙酸銨溶液：甲

2、酸（80:20:0.01，V/V/V），流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為10μL，內(nèi)標(biāo)為噻氯匹定。
　　質(zhì)譜條件：離子化方式：電噴霧離子化源（ESI）；檢測(cè)方式：正離子模式；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；離子源噴射電壓：5500V；離子源溫度：550℃；氣簾氣（CUR）壓力：25psi；霧化氣NEB（GS1，N2）壓力：55psi；輔助氣AUX（GS2，N2）壓力：50psi；碰撞氣（CAD）壓力：4psi；氯吡

3、格雷的解離電壓（DP）和碰撞能（CE）值分別為68V和21eV，活性代謝產(chǎn)物衍生物（CAMD）的DP和CE值分別為114V和26eV，噻氯匹定的DP和CE值分別為60V和23eV；用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z322.2→212.0（氯吡格雷），504.4→354.1（CAMD），264.2→154.1（噻氯匹定）。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組大鼠分別灌胃給予溶栓膠囊（75mg/kg

4、，3/日）、血脂康膠囊（60mg/kg，2/日）、心元膠囊（120mg/kg，3/日）、松齡血脈康膠囊（150mg/kg，3/日），連續(xù)給藥7天；對(duì)照組大鼠灌胃給予等體積蒸餾水，連續(xù)7天。五組大鼠均于第8天分別灌胃給予溶栓膠囊（75mg/kg）、血脂康膠囊（60mg/kg）、心元膠囊（120mg/kg）、松齡血脈康膠囊（150mg/kg）和等體積蒸餾水后灌胃給予氯吡格雷（7.5mg/kg），并于給藥前和給藥后5、10、20、30、45m

5、in、1、1.5、2、4、6、8、10h眼內(nèi)眥取血0.5mL于含有20μL125mM2-溴-3’-甲氧基苯乙酮（MPB）的肝素鈉抗凝離心管中，渦旋混合30s，6500×g離心5min后取血漿，-40℃冷凍保存待測(cè)。
　　血漿處理方法：取血漿樣品200μL，加入600μL含10.5ng/mL內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液，渦旋混合1min，6500×g離心5min，取上清液10μL進(jìn)樣測(cè)定。
　　藥動(dòng)學(xué)參數(shù)處理：采用DAS2.1.1軟件對(duì)每只

6、大鼠的系列血藥濃度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)矩自動(dòng)擬合，得到藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；采用SPSS17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。若比較的兩組參數(shù)均服從正態(tài)分布，則選用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析；若其中一組不服從正態(tài)分布，則選用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P值小于0.05則認(rèn)為兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：氯吡格雷的保留時(shí)間為5.10min，CAMD的保留時(shí)間為3.21min，噻氯匹定的保留時(shí)間為5.68min，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)其濃度

7、的測(cè)定無(wú)干擾；標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為：氯吡格雷：Y=0.02075X+0.00588（r=0.9992）（0.53～52.50ng/mL），CAMD：Y=0.00800X-0.0005（r=0.9990）（2.00～200.00ng/mL）；氯吡格雷低（1.64ng/mL）、中（6.56ng/mL）、高（42.00ng/mL）三個(gè)濃度的相對(duì)回收率分別為99.89％，100.29%，98.97%，絕對(duì)回收率分別為85.02%，85.47%，86.

8、93%，CAMD低（6.25ng/mL）、中（25.00ng/mL）、高（160.00ng/mL）三個(gè)濃度的相對(duì)回收率分別為98.96%，97.98%，99.63%，絕對(duì)回收率分別為81.54%，82.50%，83.11%，噻氯匹定的絕對(duì)回收率為85.50%；氯吡格雷低、中、高三個(gè)濃度的日內(nèi)精密度RSD分別為5.5%，2.6%，4.5%，日間精密度RSD分別為5.7%，4.0%，4.5%，CAMD低、中、高三個(gè)濃度的日內(nèi)精密度RSD分別

9、為1.6%，6.2%，4.7%，日間精密度 RSD分別為6.0%，8.7%，5.3%；氯吡格雷、CAMD血漿樣品于-40℃低溫保存一個(gè)月及反復(fù)凍融三次后性質(zhì)穩(wěn)定，且處理后的血漿樣品于室溫放置8h對(duì)測(cè)定無(wú)影響。
　　對(duì)照組大鼠體內(nèi)CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t：20574.45±5451.02ng/mL·min，AUC0-∞：21532.80±6223.07ng/mL·min，Cmax：207.50±79.33ng/mL

10、，Tmax：45.00±8.02min，t1/2：147.11±70.92min，CL：0.38±0.16L/min/kg，V：76.02±27.96L/kg。合用溶栓膠囊后，大鼠體內(nèi)CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t：22584.72±8754.93ng/mL·min，AUC0-∞：23705.66±9089.06ng/mL·min，Cmax：184.00±58.91ng/mL，Tmax：50.62±11.16min，t1/2

11、：150.69±35.81min，CL：0.36±0.15L/min/kg，V：79.29±37.18L/kg。合用血脂康膠囊后，大鼠體內(nèi)CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t：15338.44±2958.96ng/mL·min，AUC0-∞：17989.99±5221.61ng/mL·min，Cmax：181.04±57.84ng/mL，Tmax：28.12±9.98min，t1/2：211.27±66.40min，CL：0.44

12、±0.10L/min/kg，V：129.78±30.34L/kg。合用心元膠囊后，大鼠體內(nèi)CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t：19585.22±8037.93ng/mL·min，AUC0-∞：21615.22±10084.68ng/mL·min，Cmax：225.25±50.81ng/mL，Tmax：38.12±9.98 min，t1/2：181.96±73.68 min， CL：0.40±0.14 L/min/kg，V：98.

13、69±44.23 L/kg。合用松齡血脈康膠囊后，大鼠體內(nèi) CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t：17804.36±6443.45ng/mL·min，AUC0-∞：19812.59±6111.02ng/mL·min，Cmax：143.12±53.63ng/mL，Tmax：43.75±13.56min，t1/2：217.56±132.35min，CL：0.41±0.14L/min/kg，V：140.13±118.15L/kg。與對(duì)照

14、組相比，合用血脂康膠囊后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-t，Tmax明顯減?。≒<0.05），t1/2，V明顯增大（P<0.05），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而合用溶栓膠囊、心元膠囊、松齡血脈康膠囊前后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：本文所建立的LC-MS/MS測(cè)定氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于大鼠體內(nèi)血漿中氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物濃度的測(cè)定。
　　合用血脂康膠囊后，活性代謝產(chǎn)物的暴露量