細鱗魚Cathelicidins的鑒定及宿主防御肽CATH-BRALE的結(jié)構(gòu)與功能分析.pdf

1、細鱗魚（Brachymystax lenok），國家二級保護動物，隸屬鮭科細鱗屬，冷水性魚類，棲息于山溪水溫較低、水質(zhì)清澈的流水中，我國只存在一種，主要分布于我國的東北和秦嶺一帶。根據(jù)細鱗魚生活的獨特環(huán)境和棲息條件，我們預測細鱗魚體內(nèi)含有某些特殊的宿主防御基因并能分泌相應的防御性多肽。Cathelicidins，作為宿主防御基因，是動物體內(nèi)多功能的抗微生物肽家族，目前在幾乎所有種類的脊椎動物體內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，其不僅對普通革蘭氏陽性菌、革蘭氏

2、陰性菌、真菌以及病毒具有非常強的抗性，而且對許多臨床耐藥菌株同樣具有較明顯的作用。除此之外，cathelicidins還具有趨化免疫細胞、促進傷口愈合、誘導血管發(fā)生、誘導變異細胞系細胞凋亡等活性。
　　本研究利用分子生物學技術(shù)，提取了細鱗魚多種重要組織的RNA，構(gòu)建了相應組織的cDNA文庫;并使用半巢式PCR的方法，從脾臟cDNA文庫中克隆得到一種新型cathelicidins家族抗微生物肽:CATH_ BRALE。CATH_BR

3、ALE的前體包含199個氨基酸，理論等電點(pI)為12.43，理論分子量為5.2006 kDa，含有15個堿性氨基酸殘基（11個精氨酸和4個賴氨酸），靜電荷為+13，是一種較強的堿性多肽。其成熟肽有53個氨基酸殘基，序列為:RRSKARGGSRGSKMGRKDSKGGSRGRPGSGSRPGGGSSIAGASRGDRGGTRNA。與其他典型的鮭科cathelicidins比對結(jié)果表明，鮭科cathelicidins普遍都存在一個包含六

4、個氨基酸(RPGGGS)的重復基元，這表明在遺傳的不穩(wěn)定性方面，其表現(xiàn)出和哺乳動物cathelicidins一定的相似性。CATH_ BRALE在鰓中有最高的表達量，其次是脾臟、肝臟，同源建模顯示出的α-helices和反相平行的β-sheets結(jié)構(gòu)，可把CATH_BRALE歸為陽離子的抗菌肽家族。進化分析表明，細鱗魚CATH_BRALE與大西洋鮭的CATH-2有99％的Bootstrap值?；瘜W合成的CATH_ BRALE對檢測的40