華南湍蛙皮膚新型多功能抗菌肽的純化、鑒定、cDNA克隆與功能分析.pdf

1、湍蛙屬隸屬于兩棲綱無尾目蛙科,作為蛙科各屬中較為龐大的一個類群,全世界分布有45個種。目前關于湍蛙屬兩棲類皮膚分泌物中抗菌肽的報道較少,對于湍蛙屬兩棲類抗菌肽結構和功能方面的研究仍很匱乏。本研究利用蛋白質純化技術結合蛋白質組學技術,首次成功從分布于中國西南部山區(qū)的華南湍蛙皮膚提取物中純化并鑒定出3種新型抗菌肽,確定了他們的分子結構和功能活性。同時成功從華南湍蛙cDNA文庫中克隆到5條抗菌肽cDNA序列,能夠推導出5條不同的抗菌肽前體,并

2、能夠釋放5種不同的成熟抗菌肽。這些成熟肽中的其中3條與純化出抗菌肽結構相同。經分析這5條抗菌肽隸屬于2個多肽家族,它們分別是brevinin-1和brevinin-2。
　　因此,它們被命名為brevinin-1RTa(FLPU,AGVVANFLPQIICKIARKC)、brevinin-1RTb(FLGSLLGLVGKVVPTLFCKISKKC)、brevinin-1RTc(FLGSLLGLVGKIVPTIACKISKKC)、b

3、revinin-2RTa(GLMSTLKDFGKTAAKEIAQSLLSTASCKIAKTC)和brevinin-2RT(GILDTLKEFGKTAAKGIAQSLLSTASCKLAKTC).其中brevinin-1RTa、brevinin-1RTb和brevinin-2RTb經RP-HPLC從華南湍蛙皮膚提取物中純化得到,并且利用LC-MS/MS蛋白質組學方法從華南湍蛙皮膚分泌物中除鑒定到了純化出的這3條多肽外,同時也鑒定出brevi