膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞誘導(dǎo)宿主腹腔巨噬細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分：膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞與小鼠巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)產(chǎn)生的融合細(xì)胞可轉(zhuǎn)化成惡性巨噬細(xì)胞
　　目的：我們?cè)茰y(cè)膠質(zhì)瘤間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞（macrophage，MP）惡性轉(zhuǎn)化是通過膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞（Glioma Stem Progenitor cells，GSPCs）與MP融合導(dǎo)致的。本文旨在通過GSPCs與MP共培養(yǎng)來驗(yàn)證這種推測(cè)是否正確。
　　方法；將轉(zhuǎn)有紅色熒光蛋白基因(RFP)的GSPCs(SU3)與表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP

2、)的小鼠腹腔沖洗出的MP進(jìn)行體外共培養(yǎng)；用單克隆方法建立表達(dá)RFP+/GFP+雙色熒光（黃色）的細(xì)胞系，然后進(jìn)行癌細(xì)胞相關(guān)表型分析、致瘤性試驗(yàn)、鼠巨噬細(xì)胞標(biāo)記物檢測(cè)。
　　結(jié)果：（1）這兩種細(xì)胞共培養(yǎng)后，細(xì)胞群中出現(xiàn)為數(shù)不多的黃色細(xì)胞，并成功單克隆到C3,C4和C12三株細(xì)胞。（2）C12繼續(xù)傳代培養(yǎng)后分化出RFP+、EGFP+和RFP+/EGFP+三種類型細(xì)胞，但隨著傳代次數(shù)增多，EGFP+（綠色）細(xì)胞比例逐漸升高而成為主體，R

3、FP+/EGFP+（黃色）細(xì)胞比例逐漸下降并維持在較低水平，而RFP+（紅色）細(xì)胞基本消失。（3）C12細(xì)胞株中的EGFP+細(xì)胞具有：①生長(zhǎng)接觸抑制消失，增殖速度快，染色體異倍體等癌細(xì)胞特征；②在裸小鼠體內(nèi)具有高致瘤率(5/5)；③表達(dá)巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)記CD68，大部分染色體為鼠端著絲粒。
　　結(jié)論：體外模型證明我們之前在實(shí)體瘤中觀察到的人腦膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞誘導(dǎo)宿主巨噬細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化可通過細(xì)胞融合途徑實(shí)現(xiàn)。與我們先前從荷瘤鼠實(shí)體瘤組織

4、中克隆到惡性轉(zhuǎn)化的巨噬細(xì)胞株(ihCTC)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)一起，相互印證了腫瘤微環(huán)境中宿主巨噬細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化是客觀存在的。宿主細(xì)胞與腫瘤干祖細(xì)胞融合后發(fā)生的惡變既為腫瘤惡性進(jìn)展和腫瘤異質(zhì)性增添了新的內(nèi)涵；又為腫瘤靶向治療增加了新的靶標(biāo)。
　　第二部分：膠質(zhì)瘤干祖細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的社會(huì)活動(dòng):細(xì)胞連接、融合及胞釋事件的縮時(shí)攝影觀察
　　目的：已有用細(xì)胞社會(huì)學(xué)去理解實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)到的單個(gè)免疫細(xì)胞分泌的因子在免疫疾病中所起作用的報(bào)告，通過分

5、析免疫細(xì)胞社會(huì)中的腫瘤細(xì)胞與宿主巨噬細(xì)胞之間的關(guān)系，旨在探尋腫瘤細(xì)胞社會(huì)中打破免疫平衡的大事件。
　　方法：釆用紅綠雙色熒光示蹤膠質(zhì)瘤干/祖細(xì)胞與宿主巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，單克隆其中的黃色細(xì)胞，體外擴(kuò)増培養(yǎng)后于活細(xì)胞工作站實(shí)時(shí)攝影縮時(shí)成像并視頻分析目標(biāo)細(xì)胞的社會(huì)行為。
　　結(jié)果相關(guān)細(xì)胞實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)：①細(xì)胞間傳遞信息的連接管道的6種類型。②兩個(gè)活躍細(xì)胞相互作用后變成一個(gè)細(xì)胞，即細(xì)胞融合；已融合的細(xì)胞與另一個(gè)細(xì)胞再融合。③融合