不同來源人子宮內(nèi)膜在裸鼠腹腔內(nèi)的動態(tài)變化及種植情況比較.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機制目前仍不清楚，Sampson提出的“經(jīng)血逆流內(nèi)膜種植”學(xué)說能解釋內(nèi)異癥大多數(shù)臨床表現(xiàn)而廣為接受，但Sampson學(xué)說始終不能解釋為何90％以上婦女有經(jīng)血逆流，但僅有10%的婦女發(fā)?。拷陙?，郎景和提出在位內(nèi)膜的內(nèi)在特性決定了逆流內(nèi)膜在腹腔的“命運”,即種植形成異位病灶或逐漸死亡而被清除,逆流內(nèi)膜經(jīng)過3A模式(侵襲-粘附-血管形成)而在異位種植存活而形成異位病灶。而內(nèi)膜在異位建立新的血供需48h-72，可見內(nèi)膜

2、進入腹腔早期（72h內(nèi)）的組織活性是決定其能否在異位種植存活關(guān)鍵之一。但由于倫理學(xué)原因，不能在短期內(nèi)對同一患者進行多次腹腔鏡檢查，逆流內(nèi)膜在人體腹腔內(nèi)的早期變化至今仍不清楚。人子宮內(nèi)膜異位癥裸鼠模型能很好地再現(xiàn)子宮內(nèi)膜在光滑的腹膜種植的過程，且裸鼠遺傳背景明確、穩(wěn)定，不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，復(fù)制率高，能保持人子宮內(nèi)膜移植物固有的組織學(xué)形態(tài)和生物學(xué)特性。實驗重復(fù)性強，專一性好，是建立人子宮內(nèi)膜異位癥的理想動物模型。
　　而目前裸鼠EM模

3、型的建立大多采用正常婦女非月經(jīng)期子宮內(nèi)膜，很少關(guān)注內(nèi)異癥婦女月經(jīng)期自然脫落子宮內(nèi)膜在腹腔的種植狀態(tài)。本研究以T細胞免疫功能缺陷BALB/ C( nu/ nu)裸鼠為實驗載體，通過不同方法采集的內(nèi)異癥婦女及正常婦女子宮內(nèi)膜，建立“人子宮內(nèi)膜異位癥裸鼠模型”，探討不同來源子宮內(nèi)膜在裸鼠腹腔內(nèi)的動態(tài)變化及其對裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型建立的影響，為建立理想EMs動物模型提供依據(jù)，進一步揭示子宮內(nèi)膜在腹膜的種植過程。
　　方法:選擇具備手術(shù)指

4、征的內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥(術(shù)后病理證實為子宮良性病變、子宮內(nèi)膜正常)患者各24例，分別采集月經(jīng)期自然脫落內(nèi)膜、月經(jīng)期刮取內(nèi)膜以及術(shù)中刮取非月經(jīng)期內(nèi)膜分組。
　　實驗分兩部分進行：
　　第一部分：月經(jīng)期子宮內(nèi)膜在裸鼠腹腔內(nèi)的動態(tài)變化。
　　分別采集內(nèi)異癥及非內(nèi)異癥婦女月經(jīng)期子宮內(nèi)膜，每組各8位患者，采集脫落子宮內(nèi)膜后腹腔注射法建立裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，于建模后24,48,72小時處死各組裸鼠，觀察兩組內(nèi)膜進入腹腔后早期組織

5、活性（HS）動態(tài)變化。
　　第二部分：不同來源的內(nèi)膜對人子宮內(nèi)膜異位癥裸鼠模型建立的影響。
　　將兩組各16名患者根據(jù)有無內(nèi)異癥及內(nèi)膜采集方法分6組：內(nèi)異癥婦女月經(jīng)期自然脫落內(nèi)膜組（Endometriosis+shedding，EMsh）,內(nèi)異癥婦女月經(jīng)期刮取內(nèi)膜組（Endometriosis+ scoraping, EMsc），內(nèi)異癥婦女增生期刮取內(nèi)膜組（Endometriosis+proliferative stage，

6、EMpr）;非內(nèi)異癥婦女（正常）月經(jīng)期自然脫落內(nèi)膜組（Normal+shedding，NOsh）,非內(nèi)異癥婦女月經(jīng)期刮取內(nèi)膜組（Normal+scoraping, NOsc），非內(nèi)異癥婦女增生期刮取內(nèi)膜組（Normal+proliferative stage，EMpr）。建模鼠根據(jù)內(nèi)膜來源對應(yīng)分為：EMsh、EMsc、EMpr、NOsh、NOsc、NOpr組。于內(nèi)膜注射后第8天處死各組裸鼠，觀察內(nèi)膜的腹腔種植情況及各組建模成功率和病灶負

7、荷情況，采集病灶并進行組織學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　內(nèi)膜腹腔注射后的第1天(d1)，兩組子宮內(nèi)膜碎片大多游離于裸鼠腹腔內(nèi)，組織水腫，體積略增大蒼白，僅少數(shù)粘附于腸系膜、膀胱旁脂肪墊等處，但粘附不牢固，用吸取少量生理鹽水的吸管輕輕吹打，碎片即可脫離；第2天（d2），組織仍水腫，蒼白，兩組均見少數(shù)子宮內(nèi)膜碎片粘附于腹膜及子宮系膜等處，吸管吹打不易脫離；第3天（d3），游離內(nèi)膜與粘附內(nèi)膜共存，游離內(nèi)膜表面仍蒼

8、白，體積縮小，萎縮狀態(tài)，部分內(nèi)膜牢固粘附與腹膜內(nèi)，色澤鮮亮，周圍可見稀疏新生血管形成（圖2）。
　　比較兩組內(nèi)膜腹腔注射前（0h）、注射后24h、48h、72h組織活性。發(fā)現(xiàn)兩組月經(jīng)期內(nèi)膜均有不同程度損傷，腺體結(jié)構(gòu)部分破壞，間質(zhì)細胞減少，炎性細胞浸入，但內(nèi)異癥組內(nèi)膜損傷程度相對較輕，而非內(nèi)異癥組相對較重，方差分析發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥組月經(jīng)期內(nèi)膜組織評分（HS）高于非內(nèi)異癥組（P<0.05）。內(nèi)膜進入腹腔后隨著時間推移內(nèi)膜腺體結(jié)構(gòu)破壞加重，間

9、質(zhì)細胞數(shù)量減少，溶解壞死細胞增多，重復(fù)測量方差分析，EMS組HS高于NOR組，差異顯著（F=143.3,P=000）；兩組內(nèi)膜注射后不同時間HS逐漸下降，差異顯著（F=236.0,P=000）（圖3）。
　　第二部分：
　　各組均有成功建模鼠，但各組建模成功率及病灶負荷不同。內(nèi)異癥各組與非內(nèi)異癥各組對應(yīng)比較：卡方檢驗比較各組建模成功率：EMsh組與Nosh組相比，差異顯著（卡方值=3.895，p=0.048）；內(nèi)異癥組內(nèi)相比

10、，差異無顯著性；正常內(nèi)膜各組比較，差異無顯著性。
　　方差分析比較各組CSA：內(nèi)異癥組與正常組相比，EMsh組高于Nosh（p=0.006），EMsc組高于NOsc組(P=0.026）；內(nèi)異癥組內(nèi)相比，差異無顯著性；正常內(nèi)膜組內(nèi)比較：NOpr組病灶負荷高于Nosh組（P=0.031）；NOsc組病灶負荷高于Nosh組（P=0.018）。
　　結(jié)論：結(jié)合以上幾種情況的結(jié)果得出“月經(jīng)期自然脫落內(nèi)膜建立動物模型能很好地再現(xiàn)內(nèi)異癥婦