抗孕激素抑制人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞體外增殖和裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的研究.pdf

1、第一部分:抗孕激素米非司酮和利洛司酮抑制人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞體外增殖及作用機(jī)制的研究;目的:觀察抗孕激素米非司酮和利洛司酮對(duì)人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞體外增殖活性的影響,并探討其作用機(jī)制方法:人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞在含有不同濃度米非司酮和利洛司酮的培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)24-96小時(shí)后,應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法觀察兩種抗孕激素對(duì)HHUA細(xì)胞增殖活性的影響.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定抗孕激素米非司酮和利洛司酮對(duì)HHUA細(xì)胞周期分

2、布的影響.應(yīng)用免疫組化技術(shù)觀察HHUA細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的變化.通過光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡觀察兩種抗孕激素誘導(dǎo)HHUA細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化.第二部分:抗孕激素米非司酮和利洛司酮對(duì)人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞雌激素受體(ER),孕激素受體(PR)及亞型,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)體外作用的研究;目的:觀測(cè)抗孕激素米非司酮和利洛司酮對(duì)人類子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及其亞型和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(

3、VEGF)表達(dá)的影響方法:人類子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞在含有不同濃度米非司酮和利洛司酮的培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)48小時(shí)后,采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量法檢測(cè)PR-AmRNA和PR-BmRNA的表達(dá)水平;應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)HHUA細(xì)胞ER、PR受體蛋白的表達(dá);應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法分別觀察HHUA細(xì)胞VEGF mRNA和VEGF蛋白的表達(dá).第三部分:抗孕激素米非司酮和利洛司酮抑制人子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的研

4、究;目的:探討抗孕激素米非司酮和利洛司酮對(duì)人類子宮內(nèi)膜癌HHUA細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用及其作用機(jī)制方法:將2X10<'7>個(gè)HHUA細(xì)胞接種于裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤動(dòng)物模型.將荷瘤裸鼠隨機(jī)分為3組,分別應(yīng)用精制花生油、米非司酮和利洛司酮治療4周.治療期間觀察各組裸鼠生長(zhǎng)情況、移植瘤體積和形態(tài).治療結(jié)束后處死裸鼠,觀察移植瘤組織病理學(xué)變化.采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)移植瘤組織PR-AmRNA和PR-BmRNA的變