PAMAM介導(dǎo)內(nèi)皮抑素基因治療裸鼠人子宮內(nèi)膜異位癥模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過比較皮下移植及皮下注射兩種不同的方法建立裸鼠人子宮內(nèi)膜異位癥模型，為研究EMs提供更好的建模方式。進(jìn)一步借助裸鼠人EMs模型，進(jìn)行PAMAM介導(dǎo)ES基因治療，比較不同時(shí)間點(diǎn)用藥對(duì)異位病灶的抑制作用及其副作用，為國(guó)內(nèi)外該領(lǐng)域的研究提供重要的實(shí)驗(yàn)資料。 方法：取自子宮腺肌癥患者，年齡為42-47歲，行全子宮切除后刮取子宮內(nèi)膜，分別以皮下移植內(nèi)膜塊和皮下注射內(nèi)膜碎屑的方法建立裸鼠人子宮內(nèi)膜模型，自術(shù)后第三天起，每隔三日用游標(biāo)

2、卡尺測(cè)量異位病灶長(zhǎng)、寬，按公式計(jì)算病灶體積。建模后2周，4周脫頸椎處死裸鼠，取病灶行HE染色，VEGF及FⅧ檢測(cè)；取自子宮肌瘤患者，年齡為42-49歲，行全宮切除后刮取內(nèi)膜，以皮下移植內(nèi)膜塊的方法建立裸鼠人子宮內(nèi)膜模型，首先隨機(jī)分為Ⅰ組，即建模后第1天病灶局部注射PAMAM介導(dǎo)ES基因20ug治療一次和Ⅱ組，即建模后第14天病灶局部注射PAMAM介導(dǎo)ES基因20ug治療一次。然后每組又分為ES轉(zhuǎn)染組、PAMAM組、生理鹽水組及空白組四個(gè)

3、亞組。每日觀察裸鼠的精神，活動(dòng)及大小便情況，每隔三日用游標(biāo)卡尺測(cè)量異位病灶長(zhǎng)、寬，按公式計(jì)算病灶體積。給藥后1周脫頸椎處死裸鼠。通過病灶稱重，并且行HE染色，ES、VEGF、FⅧ檢測(cè)對(duì)療效進(jìn)行評(píng)估。通過對(duì)裸鼠心臟，肝臟，腎臟進(jìn)行大體觀察及HE染色，裸鼠卵巢、子宮稱重、HE染色，卵泡計(jì)數(shù)進(jìn)行副作用評(píng)估。 結(jié)果：⑴測(cè)量病灶體積變化及生長(zhǎng)曲線：移植組病灶體積隨著時(shí)間的推移逐漸增大，種植后2周左右達(dá)到高峰，以后緩慢縮小至平臺(tái)期；注射組體

4、積呈下降趨勢(shì)，種植后2周至平臺(tái)期。在相同時(shí)間點(diǎn)(2周或4周)，兩組異位病灶體積相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而兩組異位病灶重量相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑵病灶成活率比較，在相同時(shí)間點(diǎn)(2周或4周)，兩組異位病灶成活率和裸鼠累積存活率相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑶移植組和注射組，2周時(shí)病灶腺體中VEGF表達(dá)明顯增高，與4周時(shí)比較有顯著性差異(P<0.05)，MVD明顯增多，與4周時(shí)比較有顯著性差異(P<0.05)

5、。而2周和4周時(shí)，移植組病灶腺體和間質(zhì)中VEGF表達(dá)、MVD與注射組比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑷免疫組化SP法測(cè)定轉(zhuǎn)染后四組異位病灶組織中ES、VEGF以及MVD的表達(dá)。(1)在Ⅰ組中，ES轉(zhuǎn)染組腺體中ES表達(dá)明顯增高，與三對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；ES轉(zhuǎn)染組病灶腺體和間質(zhì)中VEGF的表達(dá)與三對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P>0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P>0.05)；ES轉(zhuǎn)染組MVD與三對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P>0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)在Ⅱ組中，ES轉(zhuǎn)染組腺體中ES表達(dá)明顯增高，與三對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)：ES轉(zhuǎn)染組病灶腺體和間質(zhì)中VEGF的表達(dá)明顯減少，與三對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；ES轉(zhuǎn)染組MVD明顯減少，與三對(duì)

7、照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)在Ⅱ組中ES轉(zhuǎn)染組異位病灶中VEGF表達(dá)下降，MVD減少與Ⅰ組相比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸測(cè)量異位病灶體積、重量變化，(1)在Ⅰ組中，ES轉(zhuǎn)染組病灶體積、重量改變與三對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)在Ⅱ組中，ES轉(zhuǎn)染組異位病灶體積明顯縮小，重量明顯減輕，與三對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.05)，三對(duì)照組之間病灶體積、重量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義。⑹Ⅰ組和Ⅱ組中，ES轉(zhuǎn)染組與其他三對(duì)照組比較，病理檢查心臟、肝臟、腎臟、卵巢及子宮未見組織形態(tài)改變。ES轉(zhuǎn)染組內(nèi)生殖器重量和卵巢卵泡計(jì)數(shù)與三對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：①皮下移植法和皮下注射法進(jìn)行人子宮內(nèi)膜碎屑種植均可成功建立裸鼠人子宮內(nèi)膜異位癥模型，以皮下移植法病灶形成完整，便于體外觀察。②PAMAM介導(dǎo)pcDNA3.1(+)—hES20ug在移植后兩周病灶局部用藥對(duì)裸鼠人子宮內(nèi)膜異位癥模型具有治療