大鼠脊髓損傷后自噬的變化及EGCG對(duì)其影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討脊髓損傷后不同的時(shí)間、空間范圍內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞自噬的表達(dá)及表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-Gallate，EGCG）對(duì)其的影響機(jī)制。
　　方法:鉗夾法建立大鼠脊髓損傷模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組(n=40)，脊髓損傷組(n=40)，EGCG組(n=40)（分為運(yùn)動(dòng)功能測(cè)定部分和制備切片部分），用斜板實(shí)驗(yàn)和BBB評(píng)分方法觀察大鼠SCI后不同時(shí)間(1 d，3d，1 w，2 w，3 w，4 w(n=5)

2、)，運(yùn)動(dòng)功能變化及EGCG對(duì)其運(yùn)動(dòng)功能的影響;用連續(xù)切片、結(jié)晶紫染色(CV)、平面計(jì)數(shù)方法確定SCI中心，用免疫組織化學(xué)和免疫熒光方法觀察SCI后不同時(shí)間(6 h，12 h，1 d，3d，7 d(n=5))、從損傷中心到頭端不同距離(0.05～4.55 mm)，神經(jīng)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和LC-3表達(dá)的時(shí)間、空間分布規(guī)律及EGCG對(duì)其影響。
　　結(jié)果:脊髓損傷術(shù)后1 d-4w，經(jīng)斜板試驗(yàn)證實(shí)，脊髓損傷組大鼠相對(duì)于假手術(shù)組

3、斜板角度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)明顯減小，運(yùn)動(dòng)功能明顯降低（P＜0.05）;EGCG組相對(duì)于脊髓損傷組，斜板角度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)明顯增加（P＜0.05），除外1d和3d，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BBB評(píng)分結(jié)果顯示，脊髓損傷術(shù)后1 d～4w，脊髓損傷組大鼠相對(duì)于假手術(shù)組獲得了更低的評(píng)分，運(yùn)動(dòng)功能明顯降低（P＜0.05）;EGCG組相對(duì)于SCI組，大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)運(yùn)動(dòng)功能明顯改善(P＜0.05)除1d外均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CV染色結(jié)果顯示，在SCI后6h～7d時(shí)間內(nèi)，在

4、損傷中心處無神經(jīng)細(xì)胞存活，從損傷中心往頭端方向觀察發(fā)現(xiàn)，隨著距離的增加，在0.05～4.55 mm空間范圍內(nèi)，SCI組存活神經(jīng)元數(shù)增加;EGCG組與SCI組相比，在相同的時(shí)間點(diǎn)和空間距離處，存活的神經(jīng)元數(shù)明顯增加（P＜0.05）。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，自噬相關(guān)蛋白LC3在SCI后6h～7d時(shí)間內(nèi)，假手術(shù)組不表達(dá)或微量表達(dá)，SCI組LC3蛋白表達(dá)的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)與假手術(shù)組在相同時(shí)間、相同距離處比較明顯增加(P＜0.05); EGCG組與SC

5、I組相比較，LC3陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)元數(shù)明顯增加（P＜0.05），SCI后6h出現(xiàn)LC3陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)元細(xì)胞，3d時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)達(dá)高峰，持續(xù)表達(dá)7 d;自噬相關(guān)蛋白Beclin-1免疫組化檢測(cè)結(jié)果:Beclin-1在SCI后6h～7d時(shí)間內(nèi)，假手術(shù)組不表達(dá)或微量表達(dá)，SCI組beclin-1蛋白表達(dá)的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)與假手術(shù)組在相同時(shí)間、相同距離處比較明顯增加（P＜0.05）;EGCG組與SCI組相比較，Beclin-1陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)元數(shù)明顯增加(P