雌二醇抑制自噬促進(jìn)大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)恢復(fù).pdf

1、背景與目的:
　　雌二醇在不同的中樞神經(jīng)病變中已經(jīng)證實(shí)具有神經(jīng)保護(hù)作用。在脊髓損傷中，雌激素具體的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制尚未明確。先前的研究報(bào)道自噬在神經(jīng)損傷過(guò)程中起著重要的作用。本課題擬:1）動(dòng)脈夾夾閉法建立大鼠嚴(yán)重脊髓損傷模型，觀察大鼠脊髓損傷后損傷組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)變化;2）高劑量雌二醇干預(yù)治療脊髓損傷后，運(yùn)動(dòng)功能是否改善3）觀察自噬指標(biāo)在雌二醇干預(yù)脊髓損傷急性期中的變化4）離體實(shí)驗(yàn)采用PC12細(xì)胞研究雌二醇的神經(jīng)保護(hù)作用。

2、r>　　方法:
　　取120只雌性SD大鼠，體重為200-220g。所有大鼠均行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后一半在處死之前隔天給予苯甲酸雌二醇肌肉注射，一半肌注大豆油作為對(duì)照。卵巢摘除術(shù)后1周采用夾閉法建立嚴(yán)重大鼠脊髓損傷模型。假手術(shù)組僅暴露椎板，不對(duì)脊髓做夾閉損傷。大鼠隨機(jī)分成4組，每組30只:第一組:Sham-vehicle組，即假手術(shù)未肌注苯甲酸雌二醇組;第二組:Sham-E2組，即假手術(shù)肌注苯甲酸雌二醇組;第三組:SCI-vehi

3、cle組，即脊髓損傷未肌注苯甲酸雌二醇組;第四組:SCI-E2組，即脊髓損傷肌注苯甲酸雌二醇組。為比較高劑量雌二醇的療效，脊髓損傷后7天，14天，21天，28天采用BBB評(píng)分和斜板試驗(yàn)評(píng)估大鼠運(yùn)動(dòng)功能;損傷后28天HE染色觀察損傷脊髓病理形態(tài);尼氏染色觀察運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元恢復(fù)情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白印記檢測(cè)脊髓損傷后3天自噬相關(guān)蛋白如LC3、Beclin-1的表達(dá)變化。免疫組化法檢測(cè)損傷后1天，3天，7天LC3在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中的免疫活性。

4、離體實(shí)驗(yàn)采用PC12細(xì)胞觀察雌二醇對(duì)雷帕霉素（自噬敏化劑）的作用。
　　結(jié)果:
　　1.高劑量雌二醇明顯改善大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，損傷后14天，21天，28天各時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)的BBB評(píng)分及最大傾斜角度均較SCI-vehicle組高;
　　2.HE染色結(jié)果顯示，與SCI-vehicle組相比，給予雌二醇明顯減少組織壞死及缺損范圍。
　　3.Nissl染色顯示SCI-E2組較SCI-vehicle組明顯保留了脊髓

5、中的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元;
　　4.脊髓損傷術(shù)后3天，SCI-vehicle組的LC3、Beclin-1表達(dá)高于sham-vehicle組，雌二醇干預(yù)治療在mRNA和蛋白水平上抑制其表達(dá);
　　5.免疫組化結(jié)果顯示在SCI-vehicle組，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞漿中LC3免疫反應(yīng)性在3天時(shí)達(dá)高峰，在損傷后7天仍有較高水平的表達(dá)。損傷后3天，SCI-E2組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中LC3的免疫反應(yīng)性低于SCI-vehicle組和并在術(shù)后7天保持在一個(gè)較低水平

6、;
　　6.脊髓損傷3天后自噬底物SQSTM1在SCI-vehicle組較Sham-vehicle組相比有明顯降低。然而，給予雌二醇治療后，SQSTM1表達(dá)顯著增加;
　　7.在PC12細(xì)胞模型中，雌二醇預(yù)處理能降低雷帕霉素誘導(dǎo)的自噬活性并提高細(xì)胞的活力。
　　結(jié)論:
　　雌二醇在脊髓損傷過(guò)程中的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)在一定程度上與抑制過(guò)度自噬相關(guān)。其作用機(jī)制很可能通過(guò)修飾GREP1-PI3K/AKT-mTOR的信號(hào)通路來(lái)