褪黑素對(duì)大鼠急性脊髓損傷后自噬的影響.pdf

1、研究背景及目的
　　作為脊柱損傷最嚴(yán)重的并發(fā)癥,急性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)常引起軀體感覺(jué)與功能障礙的嚴(yán)重?fù)p害。對(duì)患者本人而言，其帶來(lái)了嚴(yán)重的身體和心理傷害，對(duì)整個(gè)社會(huì)而言，其造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。鑒于此，當(dāng)今醫(yī)學(xué)界對(duì)急性脊髓損傷的預(yù)防、治療和康復(fù)給予了越來(lái)越多的重視和關(guān)注。隨著病理生理學(xué)的發(fā)展，對(duì)于急性脊髓損傷的認(rèn)識(shí)也逐漸加深，將其分為原發(fā)性和繼發(fā)性脊髓損傷。由于目前臨床無(wú)法干預(yù)原發(fā)

2、性脊髓損傷，繼發(fā)性脊髓損傷在ASCI中起著重要的作用，而神經(jīng)細(xì)胞的凋亡與繼發(fā)性脊髓損傷的發(fā)生密切相關(guān)。因此抑制神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡成為ASCI早期治療的關(guān)鍵。細(xì)胞自噬是一種高度保守的生物自我保護(hù)機(jī)制，可以使變性的蛋白及喪失功能的細(xì)胞器降解并重新利用。近年來(lái)，研究證實(shí)細(xì)胞自噬與凋亡有著相互影響。
　　褪黑素（MT）是由松果腺產(chǎn)生和分泌的兩性分子，廣泛存在于機(jī)體內(nèi)，目前學(xué)者普遍認(rèn)為，褪黑素通過(guò)減輕水腫、抑制凋亡、減少氧化應(yīng)激等機(jī)制發(fā)揮其保

3、護(hù)神經(jīng)的作用。然而，褪黑素治療脊髓損傷在抗凋亡方面的機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一結(jié)論。因此,在本研究中,我們通過(guò)在 ASCI動(dòng)物模型中予以褪黑素干預(yù)，觀察急性脊髓損傷后自噬的發(fā)生并探討褪黑素對(duì)自噬的影響，研究褪黑素的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供參考。
　　材料與方法
　　108只成年SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(A組)、脊髓損傷組（B組）、褪黑素治療組（C組）。A組僅行椎板切除，暴露T11-T12節(jié)段，不損傷脊髓神經(jīng)。B組和C

4、組用改良的Allen's法建立T11-T12脊髓損傷模型，并分別在脊髓損傷后10 min腹腔注射等體積的無(wú)水乙醇和100mg/kg的MT制劑。各組分別于術(shù)后6 h、12 h、24 h隨機(jī)選取12只大鼠，取T11-T12節(jié)段脊髓標(biāo)本，6個(gè)標(biāo)本檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，6個(gè)標(biāo)本HE染色和免疫熒光切片，觀察脊髓損傷及修復(fù)情況。術(shù)后72h對(duì)3組大鼠進(jìn)行 Basso Beattie Bresnahan（BBB）運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分。
　　結(jié)果

5、r>　　脊髓損傷后，B、C兩組均出現(xiàn)了嚴(yán)重的下肢神經(jīng)功能障礙，在術(shù)后72h， C組的BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較B組明顯上升(p﹤0.05)；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)大鼠脊髓的微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）表達(dá)水平比較：C組最高、B組次之、A組最低。在6h、12 h和24 h時(shí)間點(diǎn)上各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p﹤0.05）；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)大鼠脊髓的Beclin-1表達(dá)水平比較：C組最高、B組次之、A組最低。在6h、12 h和24 h時(shí)間點(diǎn)上各組之間差異均有