FAM172A在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病中的作用初步研究.pdf

1、第一部分FAM172A在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)
　　目的：研究FAM172A在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)。
　　方法1）運(yùn)用免疫組化方法觀察FAM172A在甲狀腺腺瘤旁正常組織、甲狀腺腺瘤及甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)情況。2）運(yùn)用 Western blot在蛋白水平觀察FAM172A在甲狀腺腺瘤旁正常組織，甲狀腺腺瘤及甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：免疫組化及Western blot技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)FAM1

2、72A在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)明顯高于正常甲狀腺和甲狀腺腺瘤組織，而且FAM172A在同一患者的甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)也明顯高于其癌旁組織。
　　結(jié)論：FAM172A在甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達(dá)。
　　第二部分FAM172A通過(guò)p38 MAPK信號(hào)通路促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖
　　目的：研究新蛋白FAMl72A對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞 IHH-4增殖的影響及其機(jī)制。
　　方法：1）以前期研究工作中所構(gòu)建的

3、PDC315-FAMl72A質(zhì)粒用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染IHH-4細(xì)胞，同時(shí)用PDC315質(zhì)粒作為對(duì)照轉(zhuǎn)染IHH-4細(xì)胞。2）用MTT法和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)法觀察過(guò)表達(dá) FAMl72A基因?qū)?IHH-4細(xì)胞增殖的影響。3）應(yīng)用Western blot技術(shù)對(duì)幾個(gè)較常見(jiàn)的參與細(xì)胞增殖的通路包括 PI3K、AMPK、p38 MAPK信號(hào)通路進(jìn)行篩選，對(duì)篩選出的信號(hào)通路進(jìn)一步驗(yàn)證研究。
　　結(jié)果：1）與轉(zhuǎn)染PDC315質(zhì)粒的IHH-4細(xì)胞相比，MT

4、T法顯示PDC315-FAMl72A質(zhì)粒轉(zhuǎn)染使細(xì)胞增殖增加約18％（24小時(shí)）。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)法顯示PDC315-FAM172A轉(zhuǎn)染組（24、48、72、96小時(shí)）較對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)速度更快。2）過(guò)表達(dá)FAM172A可以激活I(lǐng)HH-4細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK信號(hào)通路。3）FAM172A激活p38 MAPK信號(hào)通路可被p38 MAPK抑制劑SB202190阻斷，同時(shí)FAM172A對(duì)IHH-4細(xì)胞的增殖作用也可被SB202190明顯抑制。

5、　　結(jié)論：1）FAMl72A蛋白促進(jìn)IHH-4細(xì)胞增殖，提示FAMl72A蛋白的生理功能之一是參與細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控。2）FAM172A蛋白可能通過(guò)激活p38 MAPK信號(hào)通路參與甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖調(diào)控。
　　第三部分 FAM172A對(duì)甲狀腺乳頭狀癌裸鼠成瘤的影響
　　目的：1）建立具有攝锝功能甲狀腺乳頭狀癌皮下移植瘤裸鼠模型,為研究甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機(jī)制提供工具。2）初步研究 FAM172A對(duì)甲狀腺乳頭狀癌裸鼠成瘤的影響

6、。
　　方法：1）取人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系IHH-4，以1×107細(xì)胞數(shù)制成200ul細(xì)胞懸液接種于9只裸鼠（5周齡雌性裸鼠，品系BALB/c-nu/nu）皮下，觀察成瘤時(shí)間。并用 PET-CT觀察腫瘤大小及形態(tài)，用放射性核素發(fā)射式計(jì)算機(jī)斷層（emission computed tomography, ECT）觀察移植瘤的攝锝功能。2）PDC315、PDC315-FAMl72A質(zhì)粒轉(zhuǎn)染IHH-4細(xì)胞后，接種于6只裸鼠皮下，成瘤后觀

7、察腫瘤的大小、重量及生長(zhǎng)方式。ECT觀察裸鼠移植瘤大小及攝锝功能，Western blot法研究FAM172A在腫瘤中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1）裸鼠皮下成瘤率為100.0%（9/9），細(xì)胞接種后1周裸鼠皮下可以形成肉眼可見(jiàn)的腫瘤，4周時(shí)PET-CT觀察腫瘤大小，ECT顯示腹腔注射放射性99m锝后15分鐘移植瘤可以顯像。2）與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)FAM172A的IHH-4細(xì)胞注射后的裸鼠成瘤更大、更重，而且腫瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，同時(shí)裸鼠