土曲霉化學(xué)成分及生物活性研究.pdf

1、本論文一共分為三章。第一章介紹了曲霉屬真菌土曲霉（Aspergillus terreus）次生代謝產(chǎn)物的化學(xué)成分研究，并對(duì)分離得到的兩個(gè)具有6/6/6/6環(huán)系和6/6/6環(huán)系新骨架雜萜類化合物的生源途徑進(jìn)行了探討；第二章介紹了土曲霉部分化學(xué)成分的生物活性研究，包括抗阿爾茨海默病活性、細(xì)胞毒活性及DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除活性等；第三章主要綜述了近70年來文獻(xiàn)報(bào)道的土曲霉化學(xué)成分及其生物活性的研究進(jìn)展（1946–

2、2016）。
　　土曲霉是一種常見的曲霉屬真菌，廣泛分布于土壤、海洋及動(dòng)物糞便，其次生代謝產(chǎn)物主要成分洛伐他汀能夠有效減少機(jī)體血膽固醇與低密度脂蛋白膽固醇的合成，是臨床應(yīng)用最廣泛的降血脂藥物之一，創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)與社會(huì)價(jià)值。因此，本課題對(duì)從長江灘涂中分離得到的土曲霉大米固體發(fā)酵乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，期望發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的，具有廣闊開發(fā)前景的活性成分。
　　通過正相硅膠層析柱、葡聚糖凝膠Sephadex LH-

3、20、ODS反相色譜柱、半制備HPLC等分離手段和方法，綜合運(yùn)用了1D&2D NMR、HRESIMS、X-ray單晶衍射、IR和UV等多種現(xiàn)代波譜技術(shù)，分離并鑒定了85個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)（新化合物32個(gè)），包括23個(gè)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的雜萜類化合物，9個(gè)木脂素類化合物，其中化合物1為全新6/6/6/6環(huán)系3,5-二羥基苔色酸衍生型雜萜新骨架，具有一個(gè)獨(dú)特的1,2,5-trimethyl-4,9-dioxobicyclo[3.3.1]non-2-ene

4、-3-carboxylic acid結(jié)構(gòu)，新骨架化合物2則為1的開環(huán)衍生物。
　　隨后，對(duì)新骨架化合物1（3.6mg）和2（1.8mg）進(jìn)行了抗阿爾茨海默病活性篩選，但由于這兩個(gè)化合物的量極少，均無法通過常規(guī)活性篩選方法確定化合物的靶點(diǎn)，故采用in silico target confirmation（ISTC）這種虛擬對(duì)接技術(shù)，通過評(píng)價(jià)這兩個(gè)化合物與阿爾茨海默病常見相關(guān)蛋白的結(jié)合情況來推測可能的靶點(diǎn)。虛擬對(duì)接結(jié)果顯示，化合物1和

5、2均可與β-淀粉酶（BACE1）很好的結(jié)合。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)則證實(shí)，新骨架化合物1和2在體外均具有較好的BACE1抑制活性，IC50值分別為78.8nM及59.1nM，明顯優(yōu)于禮來公司陽性藥（LY2811376；IC50值為260.2nM）。進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果則表明，化合物1可有效改善阿爾茨海默小鼠學(xué)習(xí)與記憶能力，抑制體內(nèi)BACE1活性，調(diào)節(jié)與BACE1表達(dá)相關(guān)的蛋白，促進(jìn)神經(jīng)元生長，且其上述活性與陽性藥基本一致。
　　此外，細(xì)胞毒及

6、DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1）化合物39，48及49均表現(xiàn)中等細(xì)胞毒活性，39對(duì)HCC1806，HepG2及SW1990的IC50值分別為12.28μM，5.67μM與8.62μM；48對(duì)HCC1806，HepG2及SW1990的IC50值分別為13.71μM，17.32μM與6.51μM；49對(duì)HCC1806及HepG2的IC50值分別為15.93μM與11.31μM。2）樣品化合物28在50?g/mL濃度下，其抗氧化率為78.

7、903％；化合物51在50?g/mL濃度下也有一定的DPPH自由基清除能力，其抗氧化率為76.982%。
　　本文對(duì)分離自長江灘涂的土曲霉的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果顯示其含有大量的雜萜及木脂素類化合物。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)2個(gè)新骨架化合物對(duì)BACE1具有與陽性藥一致的抑制活性，為迄今為止報(bào)道的活性最強(qiáng)的天然BACE1抑制劑，且為活性最強(qiáng)的萜類BACE1抑制劑。本研究不僅大大豐富了雜萜及木脂素的種類和骨架類型，也為BACE1抑制劑的