SEMG1、SEPT12基因與弱精子癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：檢測(cè)精囊凝膠蛋白1（SEMG1）、胞裂蛋白12（SEPT12）基因在弱精子癥（Asthenozoospermia, AZS）患者和正常對(duì)照精子中mRNA的表達(dá)，分析SEMG1、SEPT12基因與弱精子癥的相關(guān)性。
　　方法：收集成年男性正常對(duì)照組和弱精子癥組精液樣本各40例，采用Percoll密度梯度分離液純化精子，提取精子RNA并將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR（qRT-PCR）的方法，分別以對(duì)照組和弱精子癥

2、組精子的cDNA為模板，設(shè)計(jì)SEMG1、SEPT12基因的特異性擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，比較兩組精子中SEMG1、SEPT12基因mRNA表達(dá)差異。
　　結(jié)果：通過qRT-PCR進(jìn)行目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增，分別獲得特異性擴(kuò)增條帶， SEMG1目的基因片段為163bp，SEPT12目的基因片段為167bp，內(nèi)參基因GAPDH目的片段為189bp。對(duì)兩樣本組目的基因的相對(duì)表達(dá)量采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示：1. AZ

3、S組SEMG1基因的mRNA表達(dá)水平（1.98±0.24）顯著高于對(duì)照組（1.05±0.35），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；2. AZS組SEPT12基因的mRNA表達(dá)水平（0.36±0.14）顯著低于對(duì)照組（1.03±0.25），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.精囊凝膠蛋白1基因（SEMG1）在弱精子癥精子中表達(dá)上調(diào)，可能與AZS的發(fā)生有關(guān)；2.胞裂蛋白12基因（SEPT12）在弱精子癥精子中表達(dá)顯著

4、降低，可能參與AZS的發(fā)生。
　　第二部分：SEMG1、SEPT12基因的多態(tài)性研究
　　目的：應(yīng)用KASP（Kompetitive Allele-Specific PCR）高通量SNP（Single nucleotide polymorphism）檢測(cè)技術(shù)對(duì)SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn)，及SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，初步探討這四個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與

5、河南弱精子癥患者的相關(guān)性，為弱精子癥的診斷和治療提供相關(guān)的理論依據(jù)。
　　方法：收集276例正常成年男性精液樣本作為對(duì)照組，276例弱精子癥患者精液樣本作為病例組，提取精子基因組DNA，通過KASP高通量SNP檢測(cè)技術(shù)對(duì)SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn)，及SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。隨機(jī)選取各位點(diǎn)不同基因型個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序驗(yàn)證。

6、>　　結(jié)果：1.SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)、rs2301366位點(diǎn)和SEPT12基因的rs759991位點(diǎn)、rs6500634位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組中的基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡（P值均大于0.05），表明樣本具有良好的人群代表性；2. SEMG1基因的rs16989820位點(diǎn)和rs2301366位點(diǎn)其等位基因和基因型頻率在對(duì)照組和弱精子癥組分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；3. SEPT1

7、2基因rs759991位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組間的等位基因和基因型頻率分布差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），攜帶T等位基因和TT基因型個(gè)體發(fā)生弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)增高（ P=0.007， OR=1.413，95％CI：1.098-1.818;P=0.021， OR=1.891，95%CI：1.097-3.261）；4. SEPT12基因rs6500634位點(diǎn)在弱精子癥組和對(duì)照組間T等位基因頻率分布差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，攜帶T等位基

8、因的個(gè)體發(fā)生弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)降低（P=0.030，OR=0.661，95%CI：0.454-0.963）；5. SEPT12基因rs759991和rs6500634位點(diǎn)的單倍型結(jié)果顯示，攜帶C-T單倍型的個(gè)體可降低弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（P=0.006，OR=0.431，95%CI：0.233-0.798），而攜帶T-C單倍型的個(gè)體可增加弱精子癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（P=0.002，OR=1.549，95%CI：1.180-2.033）。
　　結(jié)