USP26基因突變與男性無精子癥的相關性.pdf

1、近年來，不孕不育已經成為一個世界性問題，在眾多導致不孕不育的原因中，男性不育癥所占比重已經高達50％。在男性不育癥中，無精子癥的發(fā)病率日益增高，其發(fā)病率已高達15%-20%。其原因復雜、因素之多給臨床診治帶來了很多困難。隨著臨床先進技術的應用，部分導致男性不育癥的病因已被確定，如遺傳性疾?。撼Ｈ旧w或性染色體異常；睪丸本身病變：如睪丸外傷、炎癥、扭轉以及睪丸血管病變；內分泌疾病、垂體功能亢進、垂體腫瘤、腎上腺功能亢進或低下、甲亢或甲低，

2、均可影響精子生成而造成無精子癥。但目前仍有部分病例無法探知其確切的病理機制。造成男性不育的原因主要有：染色體畸形病變、Y染色體生精基因的缺失與突變及X染色體上生精基因的突變。泛素特異蛋白酶26基因是位于X染色體上，該基因與雄性不育具有相關性。泛素蛋白酶歸屬于去泛素化酶(DUB)家族，這種酶可對泛素與蛋白質的結合產生拮抗作用，并對蛋白質的異常降解有降低的作用，而該基因的突變把該酶的這種作用在某種程度上進行了抑制，泛素特異蛋白酶26(USP

3、26)基因編碼由913個氨基酸組成的蛋白質，該基因位于Xq26.2，由2794個堿基組成，僅有單一外顯子，隸屬與男性不育癥相關的眾多候選基因之一，屬于去泛素化酶家族，其特異表達于睪丸，插入突變和點突變?yōu)槠涑Ｒ姷耐蛔冾愋?，對于與該基因生理功能相關的研究目前仍很少。本實驗通過研究USP26基因多態(tài)性在無精子癥患者與其在正常男性中的表達差異，通過seqman軟件分析比對基因測序結果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947b

4、p的基因片段中突變的方式和位點，可能對了解及揭示無精子癥發(fā)生的某些機制，對部分男性無精子癥的診斷及針對性治療有某些重要的意義。
　　目的
　　通過seqman軟件分析比對基因測序結果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947bp的基因片段中突變的方式和位點，確定無精子癥患者泛素特異蛋白酶26( USP26）基因多態(tài)性與男方無精子癥的關系。
　　材料和方法
　　1.實驗材料：根據WHO精液檢測標準

5、，精液離心后取沉渣鏡檢，3次均未發(fā)現精子可確診為無精子癥，無精子癥可以分為梗阻性與非梗阻性兩大類型，排除因輸精管道缺如(如輸精管、精囊缺如)或輸精管道阻塞(輸精管結扎、射精管梗阻)等所致梗阻性無精子癥及染色體畸形病變、Y染色體微缺失等。選取2013年1月-2013年9月來鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖中心就診的50例非梗阻性無精子癥患者作為病例組，同時取50例男方生育力正常者作為對照組，排除因男性不育實施過手術治療或通過輔助生殖技術獲得生育者

6、。清晨空腹采集病例組及對照組上肢靜脈血3ml，將所采集標本移置EP管并保存于-20℃待測。
　　2.研究方法：嚴格按照試劑盒使用方法提取病例組及對照組外周血DNA，PCR方法擴增患者外周血基因組獲得泛素特異蛋白酶26基因片段，通過seqman軟件分析比對基因測序結果，確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947bp的基因片段中突變的方式和位點。
　　3.統(tǒng)計學方法：運用seqman軟件分析測序結果，采用SPSS

7、17.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析。病例組與對照組之間的差異使用X2檢驗，雙側檢驗水準α＝0.05，P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。
　　結果
　　1.基因測序分析結果顯示：在所測的259-1206基因片段中，50例對照組均未檢測到USP26基因的突變，但在50例病例組中有12例存在USP26基因突變，其中主要表現為363-364位點插入了ACA及494位點T置換成C，其余位點未見突變。
　　2.在所測結果中，50例無精子癥

8、患者中有12例患者在363-364位點插入ACA及494位點T置換成C，突變的同時伴隨有氨基酸序列的改變，其突變率為24%，X2=13.636，P=0.000（<0.005），具有統(tǒng)計學意義。
　　3.正常生育組未見突變。P=1（>0.05），無統(tǒng)計學意義。
　　結論
　　1.男性無精子癥的發(fā)生與USP26基因突變存在某種聯系，這種基因突變可能會在某種程度上造成精液質量的嚴重下降或在一定程度上調控精子的發(fā)生，進而導致男