超聲靶向微泡破壞對PEX基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的
　?。?）采用聲諾維（SonoVue）聯(lián)合超聲輻照介導(dǎo)PEX基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細胞，旨在探討其可行性以及PEX基因?qū)κ竽z質(zhì)瘤C6細胞的影響。
　?。?）將超聲靶向微泡破壞與脂質(zhì)體聯(lián)合來增強 PEX基因在鼠膠質(zhì)瘤 C6細胞的轉(zhuǎn)染，旨在探討超聲靶向微泡破壞增強脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的可行性及優(yōu)勢所在。
　　方法
　?。?）體外生長良好的鼠膠質(zhì)瘤C6細胞經(jīng)0.25％胰酶消化計數(shù)后，按照2×105/孔的密度接種于6孔板，分為

2、空白對照組、超聲+微泡組、質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+超聲+微泡組。超聲輻照參數(shù)為頻率1MHz、輻照功率1.0W/cm2、持續(xù)時間30s、占空比20％。各組分別相應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)24h，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組細胞增強型綠色熒光蛋白（Enhance green fluorescent protein,EGFP）的表達情況、流式細胞儀檢測各組熒光細胞比例以此來評估基因轉(zhuǎn)染率、逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測細胞中PEX mRNA的表達量、流式

3、細胞儀分析細胞周期的分布。
　　（2）體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細胞按照實驗要求可分為對照組、微泡組、超聲組、超聲+微泡組、脂質(zhì)體組、超聲+微泡+脂質(zhì)體組。經(jīng)過相應(yīng)的處理,24 h后應(yīng)用熒光顯微鏡觀察EGFP的表達、流式細胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染率。
　　結(jié)果
　?。?）質(zhì)粒+超聲+微泡組：熒光顯微鏡下表達綠色熒光的細胞最多，流式細胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染率最高，逆轉(zhuǎn)錄PCR可見特異性PEX電泳條帶高表達，流式細胞儀分析細胞周期分布G0/

4、G1期百分?jǐn)?shù)明顯升高，與其他各組細胞相比，上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。
　?。?）熒光顯微鏡下，超聲+微泡+脂質(zhì)體組可見大量 EGFP表達，明顯多于其他各組；流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染率，超聲+微泡組為(8.59±1.94)%，脂質(zhì)體組為(13.71±2.99)%，明顯高于前者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；超聲+微泡+脂質(zhì)體組為(18.31±2.66)%，明顯高于其他各組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。