順鉑與海帶硫酸多糖聯(lián)合應(yīng)用對大鼠膠質(zhì)瘤C6細胞的抑制作用.pdf

1、背景：據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，癌癥居各類常見死因的前列。惡性腫瘤中的膠質(zhì)瘤難治愈易復(fù)發(fā)，多數(shù)患者存活期僅為一年左右。目前治療腫瘤的多種化療藥物主要是通過影響腫瘤細胞周期和誘導(dǎo)細胞凋亡來達到抑制腫瘤細胞的增殖的目的，其中通過不同方式增強化療藥物的抗癌作用并降低其細胞毒性的研究可以為腫瘤生物學(xué)及腫瘤化療提供一些理論依據(jù)和試驗參考。 目的： 觀察傳統(tǒng)抗癌藥物順鉑和天然提取物海帶硫酸多糖的單獨或聯(lián)合作用下，對體外培養(yǎng)的大鼠膠質(zhì)瘤C6

2、細胞系生長抑制及其作用機制，以期在細胞水平上為治療癌癥提供相關(guān)的理論依據(jù)。 方法： 對C6體外增殖的影響：采用形態(tài)學(xué)觀察、細胞計數(shù)法檢測不同藥物作用下，C6細胞形態(tài)變化及細胞存活率。 對C6細胞凋亡的影響：用Hoechst33258染色法和吖啶橙染色法，在熒光顯微鏡下觀察細胞核的形態(tài)變化和凋亡小體；通過測定培養(yǎng)液中LDH的含量來檢測細胞膜完整性，以此區(qū)別凋亡和壞死。 P53蛋白表達測定：免疫熒光結(jié)合激光共

3、聚焦掃描顯微測定細胞中P53的表達變化。 對C6細胞內(nèi)活性氧含量的測定：將不同藥物處理過的細胞收集后，用熒光分光光度計測其細胞內(nèi)活性氧的含量。 對細胞周期的影響：流式細胞術(shù)測定體外培養(yǎng)的C6細胞在不同藥物處理之后細胞周期和凋亡率的變化。 結(jié)果： 1．相差顯微鏡觀察顯示：順鉑和海帶硫酸多糖單獨作用之后細胞形態(tài)變化較小，二者聯(lián)用時，細胞形態(tài)明顯變小，細胞數(shù)量明顯減少并且出現(xiàn)凋亡。順鉑單用及和海帶硫酸多糖聯(lián)用時

4、細胞都表現(xiàn)出凋亡的特征，即細胞突起變少，細胞中顆粒和空泡增加，細胞核明顯增大。聯(lián)用的凋亡效果較單用的凋亡效果明顯。順鉑單用的壞死較聯(lián)用的壞死效果明顯。 2．細胞計數(shù)：順鉑和海帶硫酸多糖單獨作用于C6時，細胞增殖都呈現(xiàn)時間及劑量依賴性；順鉑與海帶硫酸多糖聯(lián)用時抑瘤效果明顯增強(P<0.01)。 3．用熒光顯微鏡觀察，海帶硫酸多糖單獨作用時細胞凋亡現(xiàn)象極不明顯，順鉑單獨作用時有細胞凋亡，但不顯著。二者聯(lián)用可使大量細胞凋亡或壞死。凋亡

5、細胞的細胞核中染色質(zhì)凝集并邊緣化，或者斷裂為大小不等的片斷。海帶硫酸多糖作用48小時后的C6細胞的死亡形式是凋亡。 4．LDH活性檢測表明，順鉑和海帶硫酸多糖合用時與順鉑單獨使用相比LDH活性無顯著差異(P>0.05)。 5．C6細胞內(nèi)ROS活性的測定：將不同藥物處理過的細胞收集后，用熒光分光光度計測其細胞內(nèi)活性氧的含量，順鉑和海帶硫酸多糖單獨使用較聯(lián)合使用，細胞內(nèi)活性氧的含量低，但差異不顯著。 6．P53的免疫

6、熒光染色表明：與對照組相比較，海帶硫酸多糖組差異不明顯(P>0.05)；順鉑組有明顯差異(P<0.05)；順鉑組中p53表達量比海帶硫酸多糖組中高。聯(lián)合用藥時p53表達量比單一用藥時增加，差異顯著(P<0.05)。 7．流式細胞儀檢測細胞周期顯示：與對照組比較，海帶硫酸多糖組G1期細胞增多，順鉑組G2期細胞增多，聯(lián)合用藥組，細胞周期阻滯于S期。 結(jié)論： 1、順鉑和海帶硫酸多糖聯(lián)合使用，較單獨使用時對C6的殺傷力顯