順鉑與海帶硫酸多糖聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的抑制作用.pdf

1、背景：據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，癌癥居各類常見(jiàn)死因的前列。惡性腫瘤中的膠質(zhì)瘤難治愈易復(fù)發(fā)，多數(shù)患者存活期僅為一年左右。目前治療腫瘤的多種化療藥物主要是通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的增殖的目的，其中通過(guò)不同方式增強(qiáng)化療藥物的抗癌作用并降低其細(xì)胞毒性的研究可以為腫瘤生物學(xué)及腫瘤化療提供一些理論依據(jù)和試驗(yàn)參考。 目的： 觀察傳統(tǒng)抗癌藥物順鉑和天然提取物海帶硫酸多糖的單獨(dú)或聯(lián)合作用下，對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠膠質(zhì)瘤C6

2、細(xì)胞系生長(zhǎng)抑制及其作用機(jī)制，以期在細(xì)胞水平上為治療癌癥提供相關(guān)的理論依據(jù)。 方法： 對(duì)C6體外增殖的影響：采用形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)不同藥物作用下，C6細(xì)胞形態(tài)變化及細(xì)胞存活率。 對(duì)C6細(xì)胞凋亡的影響：用Hoechst33258染色法和吖啶橙染色法，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核的形態(tài)變化和凋亡小體；通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)液中LDH的含量來(lái)檢測(cè)細(xì)胞膜完整性，以此區(qū)別凋亡和壞死。 P53蛋白表達(dá)測(cè)定：免疫熒光結(jié)合激光共

3、聚焦掃描顯微測(cè)定細(xì)胞中P53的表達(dá)變化。 對(duì)C6細(xì)胞內(nèi)活性氧含量的測(cè)定：將不同藥物處理過(guò)的細(xì)胞收集后，用熒光分光光度計(jì)測(cè)其細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量。 對(duì)細(xì)胞周期的影響：流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定體外培養(yǎng)的C6細(xì)胞在不同藥物處理之后細(xì)胞周期和凋亡率的變化。 結(jié)果： 1．相差顯微鏡觀察顯示：順鉑和海帶硫酸多糖單獨(dú)作用之后細(xì)胞形態(tài)變化較小，二者聯(lián)用時(shí)，細(xì)胞形態(tài)明顯變小，細(xì)胞數(shù)量明顯減少并且出現(xiàn)凋亡。順鉑單用及和海帶硫酸多糖聯(lián)用時(shí)

4、細(xì)胞都表現(xiàn)出凋亡的特征，即細(xì)胞突起變少，細(xì)胞中顆粒和空泡增加，細(xì)胞核明顯增大。聯(lián)用的凋亡效果較單用的凋亡效果明顯。順鉑單用的壞死較聯(lián)用的壞死效果明顯。 2．細(xì)胞計(jì)數(shù)：順鉑和海帶硫酸多糖單獨(dú)作用于C6時(shí)，細(xì)胞增殖都呈現(xiàn)時(shí)間及劑量依賴性；順鉑與海帶硫酸多糖聯(lián)用時(shí)抑瘤效果明顯增強(qiáng)(P<0.01)。 3．用熒光顯微鏡觀察，海帶硫酸多糖單獨(dú)作用時(shí)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象極不明顯，順鉑單獨(dú)作用時(shí)有細(xì)胞凋亡，但不顯著。二者聯(lián)用可使大量細(xì)胞凋亡或壞死。凋亡

5、細(xì)胞的細(xì)胞核中染色質(zhì)凝集并邊緣化，或者斷裂為大小不等的片斷。海帶硫酸多糖作用48小時(shí)后的C6細(xì)胞的死亡形式是凋亡。 4．LDH活性檢測(cè)表明，順鉑和海帶硫酸多糖合用時(shí)與順鉑單獨(dú)使用相比LDH活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。 5．C6細(xì)胞內(nèi)ROS活性的測(cè)定：將不同藥物處理過(guò)的細(xì)胞收集后，用熒光分光光度計(jì)測(cè)其細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量，順鉑和海帶硫酸多糖單獨(dú)使用較聯(lián)合使用，細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量低，但差異不顯著。 6．P53的免疫

6、熒光染色表明：與對(duì)照組相比較，海帶硫酸多糖組差異不明顯(P>0.05)；順鉑組有明顯差異(P<0.05)；順鉑組中p53表達(dá)量比海帶硫酸多糖組中高。聯(lián)合用藥時(shí)p53表達(dá)量比單一用藥時(shí)增加，差異顯著(P<0.05)。 7．流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期顯示：與對(duì)照組比較，海帶硫酸多糖組G1期細(xì)胞增多，順鉑組G2期細(xì)胞增多，聯(lián)合用藥組，細(xì)胞周期阻滯于S期。 結(jié)論： 1、順鉑和海帶硫酸多糖聯(lián)合使用，較單獨(dú)使用時(shí)對(duì)C6的殺傷力顯