大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞及巨噬細(xì)胞對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株遷移能力影響的研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，盡管多種治療方法均報(bào)道取得一定進(jìn)展，但總體療效改善不明顯，死亡率較高，是神經(jīng)外科領(lǐng)域的一個(gè)重要研究方向。膠質(zhì)瘤中有大量的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，在不同的文獻(xiàn)中，這些細(xì)胞有的被稱為小膠質(zhì)細(xì)胞，有的被稱為巨噬細(xì)胞，也有的被稱為膠質(zhì)瘤相關(guān)性小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞(Glioma associated microglia/macrophages，GAMs)。結(jié)合文獻(xiàn)內(nèi)容，這三個(gè)名稱所指的是同一組細(xì)胞群。在膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)中

2、，腦組織中特有的巨噬細(xì)胞，即小膠質(zhì)細(xì)胞被腫瘤釋放的多種趨化因子招募，浸潤(rùn)到腫瘤中心和周圍;同時(shí)由于血腦屏障的破壞，外周的巨噬細(xì)胞也浸潤(rùn)其中，和小膠質(zhì)細(xì)胞一起，共同組成了GAMs。
　　相關(guān)研究結(jié)果提示盡管膠質(zhì)瘤組織中伴隨著大量GAMs浸潤(rùn)，但在腫瘤組織中GAMs的抗腫瘤作用被抑制，其在腫瘤微環(huán)境中被馴化，反而為膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)、侵襲創(chuàng)造了有利條件。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞與GAMs相互作用過(guò)程中，GAMs產(chǎn)生的IL-10、IL-18、MMP-9等

3、細(xì)胞因子在抑制免疫、促進(jìn)腫瘤遷移過(guò)程中發(fā)揮了作用。同時(shí)，膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生的TGF-β、FAS配體等因子也在誘導(dǎo)、馴化GAMs使其由抗腫瘤作用向促腫瘤作用轉(zhuǎn)變。由于組成GAMs的小膠質(zhì)細(xì)胞和外周血來(lái)源的巨噬細(xì)胞均屬于巨噬細(xì)胞群，是巨噬細(xì)胞在不同時(shí)期、不同組織的特異性分化，且分子標(biāo)志物也基本一致，使膠質(zhì)瘤中這兩種細(xì)胞難以區(qū)分。這兩種具有同源性的不同來(lái)源的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞在膠質(zhì)瘤中生物學(xué)效應(yīng)是否一致，是一個(gè)值得探討的問(wèn)題。
　　本研究

4、采用體外分離培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞及外周血巨噬細(xì)胞，然后將小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株共培養(yǎng)，于共培養(yǎng)0h、24h、48h行劃痕實(shí)驗(yàn)，以成纖維細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞共培養(yǎng)為陽(yáng)性對(duì)照，單純膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)為陰性對(duì)照，每次劃痕后6h觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并計(jì)算愈合率。同時(shí)，于共培養(yǎng)24h、48h流式細(xì)胞分選分離小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及與分別這兩種細(xì)胞共培養(yǎng)的C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，將獲得的各組細(xì)胞與未共培養(yǎng)的三種細(xì)胞分別行WB檢測(cè)，了解共培養(yǎng)前后小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞

5、IL-10、IL-18、MMP-9表達(dá)水平的改變及相應(yīng)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株TGF-β、FAS配體表達(dá)水平的改變。
　　劃痕實(shí)驗(yàn)提示與單純C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)相比，共培養(yǎng)初期(0h)小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均表現(xiàn)為抗腫瘤效果，抑制腫瘤遷移(P＜0.05)，但共培養(yǎng)一段時(shí)間(24h、48h)后，其抗腫瘤作用消失，兩種細(xì)胞被馴化，均表現(xiàn)為促進(jìn)腫瘤遷移且促進(jìn)效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　在共培養(yǎng)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)(24h、48h)分離

6、細(xì)胞并提取蛋白行WB檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的IL-10、IL-18、MMP-9蛋白表達(dá)均較0h升高，且共培養(yǎng)后兩種細(xì)胞之間蛋白表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。共培養(yǎng)24h、48h時(shí)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞TGF-β、FAS配體表達(dá)水平較共培養(yǎng)前(0h)升高且兩組膠質(zhì)瘤細(xì)胞間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說(shuō)明共培養(yǎng)的C6細(xì)胞株受小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的影響也一致。
　　結(jié)合劃痕實(shí)驗(yàn)和WB檢測(cè)結(jié)果，可以認(rèn)為經(jīng)過(guò)膠質(zhì)瘤細(xì)胞馴化的小膠質(zhì)細(xì)胞與巨