定心方通過Ang1-Tie2通路干預(yù)動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血管生成的機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　急性冠脈綜合征(ACS)，是一種集中發(fā)生在心血管疾病患者群體中的高頻率心臟事件，在各種有害因素的刺激下，已形成的冠狀動脈粥樣斑塊由穩(wěn)定斑塊變成易損斑塊并發(fā)生破裂，以致繼發(fā)血栓的形成是誘導(dǎo)其發(fā)病的公認(rèn)的病理生理基礎(chǔ)。與之有關(guān)的大量學(xué)術(shù)研究表明，新生血管是決定AS斑塊性質(zhì)是否為易損斑塊的至關(guān)重要的因素，尤其是內(nèi)膜新生血管，其生成過程與成熟過程與斑塊穩(wěn)定性的進(jìn)展有密切相關(guān)性。Ang1-Tie2是維持新生血管穩(wěn)定的重要通路。V

2、EGF，作為當(dāng)前已經(jīng)證實(shí)的最具有促進(jìn)血管分化成熟作用的生長因子，不僅能特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)膜新生血管細(xì)胞，并強(qiáng)有力的誘導(dǎo)其增殖、分化，引發(fā)體內(nèi)血管生成，還能夠使進(jìn)出血管壁的產(chǎn)物增多以及分泌物增加。對于已生成的血管結(jié)構(gòu)，VEGF可促進(jìn)其已成結(jié)構(gòu)的分化，改建和維持。Ang1/Tie2體系和VEGF之間保持著一種相互調(diào)節(jié)的關(guān)系，它在維持血管的完整性方面起著重要作用。
　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣虛、痰濁、血瘀是引起動脈粥樣硬化發(fā)病的重要病

3、理因素。益氣活血是一種重要的治療AS的方法。定心方是南方醫(yī)院中醫(yī)科經(jīng)驗(yàn)方。功效為益氣養(yǎng)心，活血解毒及清熱祛痰。經(jīng)臨床研究證實(shí)對冠心病有良好的防治療效。三七皂苷R1作為定心方組方藥物三七的重要成分之一，也能顯著的改變動脈粥樣硬化斑塊的病理進(jìn)程。
　　目的：
　　本研究開展DXR和PNSR1防治AS的機(jī)理研究，通過對小鼠主動脈斑塊內(nèi)血管和在體外模擬血管的研究，觀察DXR和PNSR1對血管生成的抑制作用;探討二者對于Ang1-Ti

4、e2通路的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用OX-LDL100mg/ml損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24h，分別觀察DXR及PNSR1含藥血清對細(xì)胞遷移及其小管形成的影響。采用免疫印跡法(Western Blot)檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)和血管緊張素Ang1及受體Tie2的表達(dá)。采用雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)觀察DXR及PNSR1對體外血管生成的影響。用高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠建立AS模型，

5、隨機(jī)分為辛伐他汀組，給藥組和正常組。給藥12周后處死小鼠。分離出胸主動脈，主動脈病理損傷組織學(xué)觀察主動脈根部連續(xù)石蠟切片，HE染色法觀察DXR及PNSR1對小鼠主動脈血管斑塊體積的影響，免疫組化檢測CD34的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　DXR及PNSR1使體外血管生成數(shù)目減少，受DXR及PNSR1干預(yù)的HUVEC細(xì)胞中的Ang1蛋白和Tie2蛋白表達(dá)量上調(diào)，VEGF蛋白表達(dá)量下降。受PNSR1干預(yù)的小鼠組織中的CD34陽性率