Aliskiren對動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生血管形成的影響及機制研究.pdf

1、背景：動脈粥樣硬化（AS）是缺血性心腦血管疾病主要的病理生理基礎。臨床研究發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定性AS斑塊內(nèi)出血或斑塊發(fā)生破裂是引起缺血性血管事件急性發(fā)作的主要原因。AS斑塊內(nèi)有病理性新生血管，這些血管的滲透性高、脆性大，易發(fā)生破裂，從而導致斑塊內(nèi)出血，引起急性心腦血管事件。研究證實炎癥與斑塊內(nèi)新生血管的形成關系密切，炎癥因子刺激斑塊內(nèi)部的血管新生。TLR4/NF-κB信號傳導通路可通過刺激炎癥細胞分泌炎癥因子來介導炎癥反應。有研究顯示TLR4/N

2、F-κB途徑可能會誘導MMPs表達，從而參與AS的病理過程。研究表明AS內(nèi)的多種MMPs含量升高。AS的動脈壁中MMP-2、MMP-9水平明顯增加，且增加程度與病變嚴重程度正相關。Aliskiren是新發(fā)現(xiàn)的腎素抑制劑，可明顯減少AS病變。研究證實RAAS激活后可以通過TLRs依賴的信號途徑誘導ApoE-/-小鼠AS斑塊的血管炎癥，但其作用機制與途徑尚不明確。
　　目的：觀察Aliskiren對動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生血管形成和斑塊

3、穩(wěn)定性的影響，探討Aliskiren是否通過抑制TLR4/NF-κB信號通路介導的炎癥反應及MMP-2、MMP-9的生成來影響新生血管的形成，增強斑塊的穩(wěn)定性。
　　方法：取30只健康雄性、8周齡的載脂蛋白 E基因敲除（ApoE-/-）小鼠，將其隨機分為3組：模型組10只、Aliskiren低劑量組10只、Aliskiren高劑量組10只，另取C57BL/6小鼠10只作為對照組。Aliskiren低劑量組、高劑量組分別給予Alis

4、kiren25mg/kg/d，50mg/kg/d灌胃；C57BL/6小鼠及模型組給予生理鹽水灌胃1mL/100g/d，灌胃時間為12周。制作主動脈根部切片，免疫組化染色觀察分析斑塊內(nèi)新生血管的密度；HE染色分析斑塊形態(tài)，計算血管斑塊面積、管腔面積；油紅 O染色觀察斑內(nèi)脂質(zhì)成分含量；Masson染色觀察斑塊中膠原含量；ELISA檢測血清中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平；RT-PCR法檢測主動脈組織中MMP-2、M

5、MP-9、TLR4mRNA水平變化；Western Blot法檢測主動脈組織中MMP-2、MMP-9、TLR4及NF-κB蛋白水平變化。
　　結果：⑴模型組小鼠血清 TC、TG、LDL-C濃度較對照組明顯升高（P＜0.05）；Aliskiren低劑量組和高劑量組小鼠血清 TC、TG、LDL-C濃度與模型組無明顯變化（P＞0.05）。⑵模型組小鼠主動脈AS斑塊形成顯著，管腔狹窄較重，動脈內(nèi)膜不連續(xù)、不光滑，內(nèi)皮細胞部分缺失。與模型組

6、相比，Aliskiren低劑量組和高劑量組斑塊面積、斑塊面積/管腔面積比值明顯降低（P＜0.05）；與Aliskiren低劑量組相比，Aliskiren高劑量組降低更顯著（P＜0.05）。⑶模型組小鼠主動脈AS斑塊內(nèi)紅染的沉積的脂質(zhì)量大。Aliskiren低劑量組和高劑量組斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量較模型組明顯減少（P＜0.05）；與Aliskiren低劑量組相比，Aliskiren高劑量組降低更顯著（P＜0.05）。⑷模型組小鼠主動脈斑塊內(nèi)藍染膠

7、原量少。與模型組相比，Aliskiren低劑量組和高劑量組斑塊內(nèi)膠原含量增加明顯（P＜0.05）；與Aliskiren低劑量組相比，Aliskiren高劑量組增加更顯著（P＜0.05）。⑸模型組可見大量的棕褐色的顆粒，CD34陽性表達多。Aliskiren低劑量組和高劑量組新生血管較模型組顯著減少（P＜0.05）；與Aliskiren低劑量組相比，Aliskiren高劑量組新生血管減少更顯著（P＜0.05）。⑹與對照組相比，模型組TNF

8、-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，Aliskiren低劑量組和高劑量組模型組TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平明顯降低（P＜0.05），Aliskiren高劑量組降低更明顯（P＜0.05）。⑺與對照組相比，模型組MMP-2、MMP-9、TLR4 mRNA表達明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，Aliskiren低劑量組和高劑量組模型組MMP-2、MMP-9、TLR4 mR

9、NA表達明顯降低（P＜0.05），Aliskiren高劑量組降低更明顯（P＜0.05）。⑻與對照組相比，模型組MMP-2、MMP-9、TLR4及NF-κB蛋白表達顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，Aliskiren低劑量組和高劑量組MMP-2、MMP-9、TLR4及NF-κB蛋白表表達明顯降低（P＜0.05），Aliskiren高劑量組降低更明顯（P＜0.05）。
　　結論：①Aliskiren能夠減少 AS斑塊內(nèi)新生血管的