Unlicensed NK細(xì)胞亞群與狼瘡小鼠發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、背景:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種最常見(jiàn)的累及機(jī)體多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病，狼瘡性腎炎（Lupus nephritis，LN）是其最常見(jiàn)的并發(fā)癥。有關(guān)SLE的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，研究顯示遺傳、免疫紊亂、激素、感染和理化環(huán)境等均與SLE及LN的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。基于SLE的特點(diǎn)之一產(chǎn)生以ANA、抗ds-DNA抗體為主的多種自身抗體及各型LN均有免疫復(fù)合物沉積，使得

2、參與適應(yīng)性免疫反應(yīng)的 T、B淋巴細(xì)胞在 SLE的發(fā)病過(guò)程中最早受到關(guān)注并得到闡明，而有關(guān)NK細(xì)胞等固有免疫反應(yīng)細(xì)胞研究較少。
　　自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK細(xì)胞）是固有免疫反應(yīng)中的主要細(xì)胞，可通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞之間的相互作用和分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子來(lái)調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)中的T、B淋巴細(xì)胞，被認(rèn)為是連接固有免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的“橋梁”。越來(lái)越多的研究顯示NK細(xì)胞與器官特異性自身免疫性疾病有相關(guān)性。

3、依據(jù)Yokoyama等提出的“l(fā)icensing”學(xué)說(shuō)，可將NK細(xì)胞分為―licensed‖和―unlicensed‖兩種亞群。有研究發(fā)現(xiàn)在骨髓移植急性排斥期，―unlicensed‖NK細(xì)胞可促進(jìn)同種異體移植物細(xì)胞在宿主體內(nèi)的存活。本研究旨在使用Pristane（降植烷）誘導(dǎo)狼瘡腎模型，觀察―unlicensed‖NK細(xì)胞在狼瘡鼠發(fā)病過(guò)程中的作用。
　　目的:
　　采用 Pristane（降植烷）誘導(dǎo)狼瘡小鼠模型，探討un

4、licensed NK細(xì)胞亞群在SLE及狼瘡性腎炎發(fā)病過(guò)程中的作用，為SLE的發(fā)病機(jī)制研究提供新思路。
　　方法:
　　1.建立Pristane（降植烷）誘導(dǎo)的狼瘡小鼠模型：將18只雌性、SPF級(jí)、9-10周齡的BALB/c小鼠隨機(jī)分為兩組：（1）誘導(dǎo)組（9只）：腹腔注射0.5ml Pristane；（2）對(duì)照組（9只）：腹腔注射0.5ml PBS。觀察7個(gè)月，觀察指標(biāo)有小鼠外觀變化、體重、尿蛋白、自身抗體（ANA、抗ds-

5、DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體）水平、腎臟病理（普通光鏡和免疫熒光）等。比較兩組上述指標(biāo)間的變化。
　　2.研究unlicensed NK細(xì)胞亞群與Pristane誘導(dǎo)的狼瘡小鼠發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。將27只雌性、SPF級(jí)、9-10周齡的BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組：（1）“U-NK”組：9只，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前腹腔注射抗Ly49G2+的單克隆抗體4D11；（2）“non-NK”組：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前腹腔注射 Anti-asial

6、oGM1；（3）“model”組：9只。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)天，3組小鼠均一次性腹腔注射0.5ml Pristane。實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間為7個(gè)月，指標(biāo)有：小鼠外觀變化、體重及尿蛋白情況，自身抗體（ANA、抗 ds-DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體）水平、腎臟病理改變（普通光鏡和免疫熒光）以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK細(xì)胞亞群數(shù)量變化。
　　結(jié)果:
　　1.誘導(dǎo)組部分小鼠出表現(xiàn)了紅斑和脫毛等狼瘡樣表現(xiàn)，尿蛋白多為+1～+2，血清中

7、出現(xiàn)四種自身抗體（ANA、抗ds-DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體），腎臟組織病理光鏡下示部分腎小球體積增大，系膜細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞增生，腎間質(zhì)伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；免疫熒光提示IgG和IgM延腎小球毛細(xì)管襻和系膜區(qū)沉積。對(duì)照組無(wú)上述變化。
　　2.實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)束后，3組間小鼠存活情況及外觀變化無(wú)差異；“U-NK”組尿蛋白、自身抗體水平及腎臟病理改變均較“non-NK”和“model”組明顯好轉(zhuǎn)；而相對(duì)于“model”組，