Unlicensed NK細胞亞群與狼瘡小鼠發(fā)病機制的研究.pdf

1、背景:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種最常見的累及機體多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病，狼瘡性腎炎（Lupus nephritis，LN）是其最常見的并發(fā)癥。有關SLE的發(fā)病機制十分復雜，研究顯示遺傳、免疫紊亂、激素、感染和理化環(huán)境等均與SLE及LN的發(fā)生發(fā)展密切相關。基于SLE的特點之一產(chǎn)生以ANA、抗ds-DNA抗體為主的多種自身抗體及各型LN均有免疫復合物沉積，使得

2、參與適應性免疫反應的 T、B淋巴細胞在 SLE的發(fā)病過程中最早受到關注并得到闡明，而有關NK細胞等固有免疫反應細胞研究較少。
　　自然殺傷細胞（natural killer cell，NK細胞）是固有免疫反應中的主要細胞，可通過細胞-細胞之間的相互作用和分泌多種細胞因子和趨化因子來調節(jié)適應性免疫反應中的T、B淋巴細胞，被認為是連接固有免疫反應和適應性免疫反應的“橋梁”。越來越多的研究顯示NK細胞與器官特異性自身免疫性疾病有相關性。

3、依據(jù)Yokoyama等提出的“l(fā)icensing”學說，可將NK細胞分為―licensed‖和―unlicensed‖兩種亞群。有研究發(fā)現(xiàn)在骨髓移植急性排斥期，―unlicensed‖NK細胞可促進同種異體移植物細胞在宿主體內的存活。本研究旨在使用Pristane（降植烷）誘導狼瘡腎模型，觀察―unlicensed‖NK細胞在狼瘡鼠發(fā)病過程中的作用。
　　目的:
　　采用 Pristane（降植烷）誘導狼瘡小鼠模型，探討un

4、licensed NK細胞亞群在SLE及狼瘡性腎炎發(fā)病過程中的作用，為SLE的發(fā)病機制研究提供新思路。
　　方法:
　　1.建立Pristane（降植烷）誘導的狼瘡小鼠模型：將18只雌性、SPF級、9-10周齡的BALB/c小鼠隨機分為兩組：（1）誘導組（9只）：腹腔注射0.5ml Pristane；（2）對照組（9只）：腹腔注射0.5ml PBS。觀察7個月，觀察指標有小鼠外觀變化、體重、尿蛋白、自身抗體（ANA、抗ds-

5、DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體）水平、腎臟病理（普通光鏡和免疫熒光）等。比較兩組上述指標間的變化。
　　2.研究unlicensed NK細胞亞群與Pristane誘導的狼瘡小鼠發(fā)病機制的關系。將27只雌性、SPF級、9-10周齡的BALB/c小鼠隨機分為3組：（1）“U-NK”組：9只，實驗開始前腹腔注射抗Ly49G2+的單克隆抗體4D11；（2）“non-NK”組：實驗開始前腹腔注射 Anti-asial

6、oGM1；（3）“model”組：9只。實驗開始當天，3組小鼠均一次性腹腔注射0.5ml Pristane。實驗觀察時間為7個月，指標有：小鼠外觀變化、體重及尿蛋白情況，自身抗體（ANA、抗 ds-DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體）水平、腎臟病理改變（普通光鏡和免疫熒光）以及流式細胞儀檢測NK細胞亞群數(shù)量變化。
　　結果:
　　1.誘導組部分小鼠出表現(xiàn)了紅斑和脫毛等狼瘡樣表現(xiàn)，尿蛋白多為+1～+2，血清中

7、出現(xiàn)四種自身抗體（ANA、抗ds-DNA抗體、抗nRNP/Sm抗體和抗ss-DNA抗體），腎臟組織病理光鏡下示部分腎小球體積增大，系膜細胞及內皮細胞增生，腎間質伴炎癥細胞浸潤；免疫熒光提示IgG和IgM延腎小球毛細管襻和系膜區(qū)沉積。對照組無上述變化。
　　2.實驗觀察結束后，3組間小鼠存活情況及外觀變化無差異；“U-NK”組尿蛋白、自身抗體水平及腎臟病理改變均較“non-NK”和“model”組明顯好轉；而相對于“model”組，