新型SHIV感染性克隆的構(gòu)建與篩選及猴NK細(xì)胞亞群的研究.pdf

1、SHIV，即SIV/HIV嵌合病毒，是利用基因重組技術(shù)，將SIV和HIV的相應(yīng)基因進(jìn)行置換而構(gòu)建出來的重組嵌合病毒。SHIV/恒河猴動(dòng)物模型是研究AIDS疫苗、藥物及HIV致病機(jī)理的重要工具。盡管目前中國(guó)艾滋病傳播形勢(shì)相當(dāng)嚴(yán)峻，但是仍然沒有構(gòu)建出嵌合中國(guó)株HIV基因并能夠快速發(fā)病的SHIV病毒，對(duì)于中國(guó)源恒河猴的研究也剛剛起步。 為了構(gòu)建中國(guó)SHIV/恒河猴動(dòng)物模型，本文做了兩個(gè)方面的基礎(chǔ)研究：一是中國(guó)SHIV的構(gòu)建；二是中國(guó)源

2、恒河猴體內(nèi)NK細(xì)胞的亞群分布情況。一旦感染性SHIV構(gòu)建成功，即可選擇合適猴子構(gòu)建動(dòng)物模型。為研究調(diào)節(jié)基因在SHIV致病性中作用，本文從5份HIV分子流行病學(xué)調(diào)查的陽性樣品(HIV-XJN0021，HIV-XJN003l，HIV-XJN0041，HIV-XJN005l，HIV-XJN0061)和2份新疆隊(duì)列樣品中(HIV-XJDCl353和HIV-XJDC0135)PCR擴(kuò)增到5份含有中國(guó)HIV-1毒株tat,rev&vpu基因1.2k

3、b的目的片段，以SHIV-89.6P的半長(zhǎng)克隆株3’-SHIV-KB9為主要骨架，將相應(yīng)的片段進(jìn)行替換，構(gòu)建成40個(gè)半長(zhǎng)克隆，并通過酶切分析及序列分析證明其序列多態(tài)性。將半長(zhǎng)克隆與5’-SHIV-KB9連接，經(jīng)過鑒定，得到了26個(gè)攜帶中國(guó)主要流行亞型B'/C不同毒株tat,rev&vpu基因的SHIVcDNA嵌合克隆。分別將這些重組病毒cDNA轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，確定其蛋白表達(dá)情況及病毒包裝情況。收集轉(zhuǎn)染陽性的克隆上清感染PM1細(xì)胞，以確

4、定其感染力。結(jié)果顯示并未得到感染力強(qiáng)的SHIV克隆，還需構(gòu)建更多的克隆進(jìn)行篩選。 同時(shí)，本文利用多色流式技術(shù)對(duì)中國(guó)源恒河猴體內(nèi)的NK細(xì)胞的亞群分布情況進(jìn)行了研究。通過六色流式技術(shù)，用兩種定義方法統(tǒng)計(jì)17只正常恒河猴體內(nèi)NK細(xì)胞的數(shù)量，并比較各亞群細(xì)胞的表面因子分布，從而確立了NK細(xì)胞亞群的定義方法，得到猴體內(nèi)正常狀態(tài)下NK細(xì)胞及各亞群細(xì)胞的水平，為篩選合適的受體猴提供了技術(shù)參數(shù)。此外，分析了兩只感染SHIV病毒的猴體內(nèi)NK細(xì)胞各