SKP2在食管癌中的擴增和表達變化及其作用機制研究.pdf

1、蛋白泛素化及隨后的蛋白酶體降解途徑在許多細胞生命活動中發(fā)揮重要的作用，如細胞周期的進展、細胞的生長與分化、凋亡、基因轉錄和信號傳導等。SCF(SKP1，Cullin/CDC53，F(xiàn)—box蛋白)復合物是一種保守的E3泛素連接酶，參與蛋白的泛素化降解，其中的F—box蛋白與底物相互作用，負責底物的識別。S期激酶相關蛋白2(SKP2)是F—box蛋白家族的成員之一，在SCFSKP2復合物中發(fā)揮作用。本實驗室前期的比較基因組雜交(CGH)結果

2、發(fā)現(xiàn)5號染色體短臂在食管癌中的擴增比較常見，而SKP2基因恰好位于該染色體短臂的一區(qū)三帶(5p13)，本研究旨在探討SKP2在食管癌中的擴增狀態(tài)和表達水平及其在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 首先采用熒光原位雜交方法檢測了SKP2在50例食管癌中的擴增情況，發(fā)現(xiàn)擴增頻率為46％(23/50)，且其擴增與腫瘤分期和淋巴結轉移相關(P<0.05)。Real-Time PCR檢測的10對食管癌及其癌旁配對標本中，5例腫瘤組織存在SKP2的擴

3、增。RT-PCR和Western—blotting檢測發(fā)現(xiàn)SKP2擴增病例的蛋白表達水平也升高，說明基因擴增是SKP2過表達的原因之一。140例標本的免疫組化結果表明SKP2在食管癌組織中表達升高，其過表達與腫瘤分期和淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，但與預后相關無顯著性。 通過RNA干擾敲降SKP2表達對EC9706細胞周期和生長無明顯影響，但可抑制細胞的運動和侵襲能力，增加EC9706細胞的失巢凋亡，降低其軟瓊脂集落形成能

4、力，并且可抑制裸鼠皮下腫瘤的生長和肺轉移。針對SKP2影響EC9706細胞抗失巢凋亡能力這一現(xiàn)象，進一步探討了其分子機制。敲降SKP2表達后檢測了P13K—Akt、MAPK和EGFR信號通路關鍵蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)只影響Akt的活化，對Erk和EGFR激活無影響。同時，加入PI3K抑制劑后，對照組細胞的失巢凋亡也增加。 以上結果表明SKP2在食管癌中存在擴增和過表達，可影響食管癌細胞的運動和侵襲能力，并且可通過PI3K—Akt信號通