急性白血病患者凝血因子XIII表達(dá)和活性變化的研究.pdf

1、目的:
　　凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)是一種重要的凝血因子，可促進(jìn)纖維蛋白單體交聯(lián)形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊。FⅩⅢ本質(zhì)是一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶，除纖維蛋白外，其底物可多達(dá)140余種，因此參與到多種生理和病理過程中。FⅩⅢ由A亞單位二聚體(FⅩⅢ-A2)和B亞單位二聚體(FⅩⅢ-B2)結(jié)合而成，其中FⅩⅢ-A2在骨髓細(xì)胞中合成，主要存在于單核/巨噬細(xì)胞和巨核細(xì)胞中，F(xiàn)ⅩⅢ-B2由肝細(xì)胞合成。研究發(fā)現(xiàn)，急性髓系白血病粒-單核細(xì)胞型(AML-M4

2、)和單核細(xì)胞型(AML-M5)患者腫瘤細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A2含量升高。隨后發(fā)現(xiàn)急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)患者腫瘤細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A2含量也升高。正常淋巴細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)FⅩⅢ-A2，但在部分急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者的腫瘤細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A2的含量升高。本研究擬探討急性白血病患者外周血FⅩⅢ濃度和活性的變化，以及該變化是否與骨髓或外周血腫瘤細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A2的合成有關(guān)。此外，F(xiàn)ⅩⅢ作為一種重要的凝血因子，目前仍無標(biāo)準(zhǔn)的活性測定方法，本研究

3、擬建立FⅩⅢ活性測定方法，并分析急性白血病患者體內(nèi)FⅩⅢ活性和濃度的變化與患者臨床出血表現(xiàn)的相關(guān)性，同時測定血友病患者FⅩⅢ的濃度和活性，觀察該類出血性疾病患者體內(nèi)FⅩⅢ的變化。
　　方法:
　　收集2016年11月至2017年5月于北京協(xié)和醫(yī)院住院的初治急性白血病患者外周血和骨髓標(biāo)本，統(tǒng)計患者的臨床資料。分離外周血血漿，并提取外周血和骨髓單個核細(xì)胞的RNA。分別利用ELISA方法和凝血儀測定外周血血漿FⅩⅢ濃度和活性，利用

4、實時定量PCR(qRT-PCR)方法測定單個核細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢmRNA的含量。分析患者經(jīng)過治療后外周血FⅩⅢ濃度和活性的變化，以及外周血和骨髓單個核細(xì)胞內(nèi)mRNA表達(dá)量的變化。根據(jù)測定的外周血FⅩⅢ濃度和活性，分析其與急性白血病患者臨床出血表現(xiàn)的相關(guān)性。利用ELISA方法和凝血儀測定血友病患者外周血FⅩⅢ濃度和活性的，分析血友病患者FⅩⅢ的變化。
　　結(jié)果:
　　研究共納入31例初治的急性白血病患者，其中AML24例，ALL7例

5、。AML和ALL患者經(jīng)過治療后外周血FⅩⅢ濃度和活性的變化相反。AML和ALL患者治療前外周血FⅩⅢ濃度分別為24.09(20.91)μg/mL和32.08±10.60μg/mL，治療后FⅩⅢ濃度分別降低為18.43±4.74μg/mL和19.21±8.69μg/mL。AML患者治療前外周血FⅩⅢ活性為72.75±28.98％，治療后升高為94.74±17.72％。ALL患者外周血FⅩⅢ活性在治療后也有明顯升高趨勢。
　　AML和

6、ALL患者治療前外周血和骨髓單個核細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A mRNA的含量與相應(yīng)對照組無明顯差異。AML患者治療前外周血單個核細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢA亞單位(FⅩⅢ-A)外顯子3和外顯子14-15的△Ct值（△Ct exon3和△Ctexon14-15）分別為0.93±2.36，1.53±2.21，骨髓相應(yīng)的△Ctexon3和△Ct exon14-15分別為2.21±2.45，1.70±2.40;均與相應(yīng)對照組無明顯差異。ALL患者治療前外周血單個核細(xì)胞

7、內(nèi)FⅩⅢ-A△Ctexon3和△Ctexon14-15分別為1.49±1.43和1.66±1.48，骨髓相應(yīng)的△Ctexon3和△Ctexon14-15分別為1.30±1.58，1.85±2.94;均與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　急性白血病患者外周血FⅩⅢ活性與患者臨床出血表現(xiàn)無明顯相關(guān)性。
　　臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)出血的血友病A患者外周血FⅩⅢ濃度(10.74±3.15μg/mL)低于正常對照(16.55±3.29μg/mL)，

8、患者FⅩⅢ活性(80.63±20.52％)也低于正常對照(103.49±13.06％)。
　　結(jié)論:
　　AML和ALL患者治療后FⅩⅢ濃度低于治療前，但FⅩⅢ活性高于治療前，經(jīng)過治療后外周血FⅩⅢ濃度和活性的變化相反。急性白血病患者治療前外周血和骨髓單個核細(xì)胞內(nèi)FⅩⅢ-A mRNA的含量與對照組無明顯差異，推測外周血中升高的FⅩⅢ濃度與急性白血病腫瘤細(xì)胞無明顯相關(guān)，其來源尚需進(jìn)一步的探究。急性白血病患者臨床出血表現(xiàn)與外周血