SENEX基因在急性髓細胞白血病患者中的表達及其意義.pdf

1、背景：
　　急性髓細胞白血病（acute myeloid Leukemia, AML）是成人白血病中最常見的一種類型，起源于髓系干/祖細胞突變引起的血液惡性克隆性疾病，它發(fā)病所涉及的機制非常復雜且尚未明確。盡管近年來診療技術發(fā)展迅速，然而仍有相當一部分患者面臨復發(fā)或耐藥等治療難題，目前AML的5年總生存率（overall survival，OS）僅為30%-40%，而復發(fā)和難治患者的更是低于15%。白血病細胞很難被完全清除殺死，這

2、也造成了難治/復發(fā)的問題出現(xiàn)，分析其原因，可能白血病細胞存在某種自我保護機制，促使它可以逃逸化療藥物以及免疫系統(tǒng)的殺傷。
　　細胞衰老是細胞在受到內(nèi)外因素的壓力時，進入一種相對靜止且穩(wěn)定的狀態(tài)。隨著對衰老研究的深入，發(fā)現(xiàn)衰老不一定會走向不可逆的凋亡，應激性衰老（stress induced premature senescence, SIPS）是由內(nèi)外壓力因素刺激下提前發(fā)生的衰老，當壓力解除或環(huán)境發(fā)生改變后，衰老的細胞有可能會重新

3、復蘇，進入細胞周期。而有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞在放化療藥物等DNA損傷的因素下也會提前出現(xiàn)衰老。SENEX基因是與細胞衰老相關的抗凋亡的新基因，研究表明SENEX基因可介導細胞發(fā)生SIPS具有抗凋亡和免疫抑制效應。SENEX基因的特征有利于研究臨床AML的復發(fā)以及耐藥的問題，因此針對SENEX基因參與AML疾病的發(fā)生和進展的研究有著重要的價值。
　　目的：
　　本課題選擇AML患者為研究對象，QRT-PCR檢測SENEX基因mRN

4、A表達水平并分析在各個階段的AML患者（初診、復發(fā)、緩解）和正常對照組的骨髓中的表達特點及差異，明確SENEX基因的表達是否在AML細胞中上調(diào)；并將其與AML的臨床特征相結合，探討SENEX基因的表達在AML患者中的臨床意義；體外實驗利用AML細胞株初步探索SENEX基因在AML中是否通過啟動衰老信號通路、抑制促凋亡基因的作用來發(fā)揮保護白血病細胞的作用。
　　方法：
　　共收集67例已確診的AML患者的骨髓標本，其中初診AM

5、L患者21例，骨髓緩解AML患者27例，復發(fā)的AML患者19例。同時選取12例年齡性別均相匹配的非血液腫瘤疾病的缺鐵性貧血患者作為實驗對照組。本實驗應用實時熒光定量PCR檢測SENEX基因在21例初診AML患者（AML-ND組）、27例骨髓完全緩解的AML患者（AML-CR組）、19例骨髓復發(fā)的AML患者（AML-Relapse組）以及12例對照組的骨髓單個核細胞中的表達情況，比較該四組之間的基因表達水平的差異，并分析SENEX基因表達

6、水平與臨床特征和療效的關聯(lián)。其次在體外實驗中，選用細胞毒性藥物阿糖胞苷（Ara-c）刺激誘導AML細胞株NB4發(fā)生衰老，同時再聯(lián)合Ara-c與SiRNA共同處理NB4細胞株作為實驗組之一，對照組選用等量的PBS處理，72小時后檢測并分析Ara-c組與PBS組的SENEX基因mRNA表達水平的差異，同時檢測并分析Ara-c組，PBS組以及Ara-c+SiRNA組這三組細胞的凋亡水平。最后利用SiRNA沉默NB4細胞株中的SENEX基因的表

7、達，檢測該組及對照組的促凋亡基因（p53、Caspase-3）表達水平，并分析與SENEX基因的相關性。
　　結果：
　　1.SENEX基因表達水平與AML疾病的進展有明顯的相關性。AML-ND組和AML-Relapse組SENEX基因表達水平均明顯高于正常對照組，同時AML-ND組SENEX基因表達水平明顯高于AML-CR組。分析各亞型之間的AML中SEMEX基因的表達，以AML-M3的SENEX基因表達水平最高。AML患

8、者SENEX基因mRNA表達水平與骨髓原始細胞比例存在正相關性。此外分析AML初診患者的臨床特征發(fā)現(xiàn)一次化療緩解的患者（n=14）的SENEX基因表達顯著低于一次化療未緩解的患者（n=7），并且一次化療未緩解的患者預后均較差。
　　2.體外實驗中，Ara-c刺激組的細胞中SENEX基因表達水平顯著高于PBS對照組，且Ara-c刺激組的細胞基本處于早期凋亡階段。而Ara-c+SiRNA組早期凋亡階段的細胞較Ara-c刺激組顯著降低。