HIF-2α在乳腺癌中的表達(dá)和臨床意義及其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，非特殊型浸潤性癌（Non-specific type of invasive carcinoma），是浸潤性乳腺癌最常見的組織學(xué)類型，占40-70％左右。研究發(fā)現(xiàn)，缺氧微環(huán)境是實(shí)體腫瘤的典型特征，被認(rèn)為是導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展及預(yù)后差的始動(dòng)因素，為了適應(yīng)缺氧的微環(huán)境，腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生一系列生物學(xué)行為的改變，其中缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia induced factors，HIFs)發(fā)揮著重

2、要的調(diào)節(jié)作用。目前已發(fā)現(xiàn) HIFs有三個(gè)亞型：HIF-1α、HIF-2α以及 HIF-3α，以往的研究主要集中在HIF-1α，主要是HIF-1α與乳腺癌血管生成、腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移、耐藥相關(guān)蛋白等方面， HIF-2α的研究相對(duì)較少。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）指由非移動(dòng)的、極性排列的上皮細(xì)胞向移動(dòng)的、非極性排列的間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變，同時(shí)獲得向遠(yuǎn)處器官遷移、生長、種植的潛能的過程。在惡

3、性腫瘤可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng)，腫瘤侵襲性增加。
　　HIF-2α是缺氧應(yīng)激作用下產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)可以有效調(diào)控靶基因活性打破細(xì)胞內(nèi)氧失衡狀態(tài)，比如新生血管形成基因(CEGF、PIGF)、增殖轉(zhuǎn)移基因(MMP、SDF1、CXCR4、LOX)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(SNAIL、TWIST、SIP)等，有助于新生血管生成的維持，也可以對(duì)腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)，HIF-2α的異常表達(dá)參與腫瘤放化療抵抗，提示HIF-2α與腫

4、瘤的不良預(yù)后有關(guān)，HIF-2α有可能成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。Twist家族是HIF-2α眾多調(diào)控基因中的一個(gè)，Twist2也稱為Dermo1，是參與調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的主要轉(zhuǎn)錄因子，可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞EMT的過程進(jìn)而利于其遷徙、侵襲、轉(zhuǎn)移。
　　乳腺浸潤性癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化一定程度上決定了腫瘤轉(zhuǎn)移，提升了死亡率縮短了生存期，嚴(yán)重影響患者預(yù)后。目前有關(guān)乳腺癌組織中HIF-2α與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的報(bào)道較少，本課題以乳腺非特殊型浸潤性癌為研究對(duì)

5、象，采用免疫組織化學(xué)SP法和原位雜交( ISH)技術(shù)分別檢測乳腺浸潤性癌原發(fā)灶、良性纖維腺瘤、癌旁正常組織中HIF-2α蛋白和mRNA的表達(dá)情況，同時(shí)檢測癌組織中Twist2、E-cadherin以及vimentin的表達(dá)，探討HIF-2α與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是否存在關(guān)聯(lián)，并分析HIF-2α對(duì)乳腺癌預(yù)后的影響因素，為HIF-2α是否可以作為乳腺癌臨床治療的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.收集2011年8月-2012年1月乳

6、腺非特殊型浸潤性癌石蠟標(biāo)本92例、癌旁正常組織30例、纖維腺瘤21例，采用免疫組化SP法檢測各組中 HIF-2α、Twist2、E-cadherin、vimentin蛋白的表達(dá)，分別分析其表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性以及他們之間的關(guān)聯(lián)。
　　2.收集2015-2016年乳腺非特殊型浸潤性癌石蠟標(biāo)本22例、癌旁正常組織20例、纖維腺瘤20例，采用原位雜交方法檢測組織切片中HIF-2α mRNA的表達(dá)情況，從基因水平檢測其表達(dá)在乳腺癌中

7、的差異。
　　3.對(duì)92例乳腺癌進(jìn)行隨訪，采用Kapln-Meier法和 Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析，多因素Cox比例回歸模型分析乳腺癌預(yù)后的影響因素。
　　結(jié)果：
　　1.HIF-2α蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和30例癌旁正常組織中陽性率分別為71.73%（66/92）、42.85%（9/21）和36.66%（11/30），HIF-2αmRNA在22例乳腺癌、20例纖維腺瘤和20例癌旁正常組織中陽性率分

8、別為77.27%（17/22）、25.00%（5/20）和15.00%（3/20），HIF-2α蛋白以及mRNA在這三組中的表達(dá)均呈現(xiàn)一致性，很明顯看出，陽性表達(dá)較高的是乳腺癌組（P均＜0.05）。HIF-2α蛋白陽性表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子分型有關(guān)（P<0.05），與患者年齡(P=0.921)、組織學(xué)分級(jí)(P=0.566)、TNM分期(P=0.209)均無關(guān)。
　　2. Twist2蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和3

9、0例癌旁正常組織中陽性率分別為57.60%（53/92）、19.04%（4/21）和16.66%（5/30），且三組之間的不同表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Twist2蛋白的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分子分型有關(guān)（P<0.05），與患者年齡（P=0.915）、腫瘤大?。≒=0.736）、TNM分期（P=0.757）均無關(guān)。
　　3.上皮標(biāo)志物 E-cadherin在乳腺癌組陽性率58.69%（54/92）低于腺瘤組8

10、5.71%（18/21）和癌旁正常組93.33%（28/30），其表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分子分型有關(guān)（P<0.05），與患者年齡（P=0.615）、TNM分期（P=1.000）均無關(guān)。間質(zhì)標(biāo)志物vimentin在乳腺癌組陽性率46.73%（43/92）高于腺瘤組23.83%（5/21）和正常組13.33%（4/30），其表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和分子分型有關(guān)（P<0.05），與患者年齡（P=0.724）、腫

11、瘤大?。≒=0.970）、組織學(xué)分級(jí)（P=0.129）均無關(guān)。
　　4.對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，蛋白HIF-2α和Twist2的表達(dá)是存在正相關(guān)的（r=0.452，P=0.000），而上皮以及間質(zhì)兩標(biāo)志物之間的表達(dá)存在顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.570，P=0.000），HIF-2α和Twist2蛋白的表達(dá)均與E-cadherin負(fù)相關(guān)，與vimentin正相關(guān)（P均＜0.05）。
　　5. HIF-2α陰性組、Twist2陰

12、性組、E-cadherin陽性組和vimentin陰性組分別比其另一組擁有更高的總生存率和更長的平均生存時(shí)間，但只有 HIF-2α組和E-cadherin組K-M生存曲線差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Twist2組和vimentin組K-M生存曲線不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　6.多因素生存分析顯示只有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（RR=6.022，95%CI2.852~12.717， P=0.000）、腫瘤大?。≧R=2.621，

13、95%CI1.123~6.117，P=0.026）和HIF-2α狀態(tài)（RR=3.821，95%CI1.092~13.372，P=0.036）可以作為乳腺癌患者生存預(yù)后的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），而其他預(yù)后指標(biāo)，比如年齡、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、分子分型等均為乳腺癌的非獨(dú)立預(yù)后因素（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　HIF-2α在乳腺癌中異常表達(dá)，可能通過介導(dǎo)Twist2參與到乳腺癌EMT過程中，引起了腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移并影響