異甘草素通過促進Nrf2抗氧化途徑抑制ROS和（或）NF-κB介導的NLRP3炎癥小體活化減輕實驗性腦出血后早期腦損傷.pdf

1、腦出血（Intracerebral hemorrhage，ICH）后可誘導強烈的氧化應激(Oxidativestress，OS)應答、炎癥過程及大量白的細胞浸潤，從而造成嚴重的血腦屏障破壞、腦水腫及神經細胞死亡等。這些腦損害與腦出血后患者神經功能惡化和預后密切相關。然而，目前對于腦出血后腦組織損傷的治療，尚無特效方法。異甘草素(Isoliquiritigenin，ILG)被報道具有多種生物學功能，包括能激活核因子E-2相關因子2(Nuc

2、lear factor erythroid-2related factor2，Nrf2)介導的抗氧化系統(tǒng)，負性調控核因子κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)和Nod樣受體家族熱蛋白結構域3(Nod-like receptor family-pyrin domain-containing3，NLRP3)炎癥小體途徑等。但是，其在腦出血后早期腦損傷中的作用及作用相關的分子機制目前仍不清楚。腦出血后，Nrf2活化所

3、誘導的抗氧化系統(tǒng)具有腦保護作用，NLRP3炎癥小體途徑活化則加重腦損傷，然而兩者在腦出血后早期腦損傷中的相互作用關系仍有待闡明。
　　研究目的:
　　1.探索ILG在腦出血后早期腦損傷中的作用及相關分子機制;2.探究在腦出血后早期腦損傷中，Nrf2活化所誘導的抗氧化系統(tǒng)與NLRP3炎癥小體途徑活化之間的關系。
　　研究方法:
　　建造無菌膠原酶Ⅳ誘導的大鼠腦出血模型及相應的假手術模型。模型建造前24h，大鼠右側腦

4、室內注入Nrf2small interfering RNA(siRNA)。模型建造后30min、12h、24h、48h，大鼠腹腔內注射不同劑量ILG（10、20或40mg/kg）。模型建造后24h或72h取腦組織進行相應評分、檢測和分析:行為學缺損[改良的神經功能缺損評分(Modified Neurological Severity Score，mNSS)]、組織學損害[蘇木素&伊紅染色(Hematoxylin&eosin staini

5、ng，H&E staining)]、腦水腫[腦水容量(Brain water content，BWC)干/濕重法）]、血腦屏障(Brain-bloodbarrier，BBB)破壞[伊文思藍(Evans blue，EB)染料滲透法]、神經元狀態(tài)惡化[FJC染色(Fluoro-jade(@)C staining，FJC staining)]、實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應(Quantitative real-time RT PCR，qRT-P

6、CR)，蛋白質印跡(Western blot，WB)，免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）/免疫熒光(Immunofluorescence，IF)染色，酶聯免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)。使用相應試劑盒檢測分析血腫周圍腦組織中還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(Glutathione/Oxidized glutathione，GSH/GSSG)含量、活性

7、氧族(Reactive oxygenspecies，ROS)含量、過氧化氫酶(Catalase，CAT)活性及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性。
　　研究結果:
　　1.ILG20mg/kg和40mg/kg腹腔內注射給藥顯著減輕腦出血后早期腦損傷（行為學缺損、組織學損害、血腦屏障破壞、腦水腫、神經元惡化），但兩者的腦保護作用程度無明顯差異。選擇20mg/kg為后續(xù)實驗ILG的給藥劑量;<

8、br>　　2.ILG20mg/kg給藥后活化Nrf2介導的抗氧化系統(tǒng)，抑制NF-κB和NLRP3炎癥小體途徑活化，抑制ROS產生;
　　3.Nrf2siRNA沉默Nrf2基因后，腦出血誘導的早期腦損傷加重（行為學缺損、腦水腫、神經元惡化）和NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表達增加。ILG給藥后減輕上述損傷的加重和蛋白表達的上調。
　　研究結論:
　　1.ILG能夠顯著改善腦出血