大鼠肝再生相關(guān)lncRNA對(duì)大鼠肝細(xì)胞株BRL-3A增殖的作用研究.pdf

1、近些年來(lái)，研究證明lncRNA能夠調(diào)控多種生理和病理進(jìn)程，包括對(duì)大鼠肝再生的調(diào)控。但是lncRNA對(duì)肝再生的調(diào)控機(jī)制還不清楚。為了了解lncRNA是如何調(diào)控肝再生，本研究采用高通量測(cè)序、RT-PCR檢測(cè)大鼠2/3肝切除誘導(dǎo)的肝再生3個(gè)時(shí)間點(diǎn)肝細(xì)胞中表達(dá)有意義的lncRNA。結(jié)果表明在大鼠肝再生3個(gè)時(shí)間點(diǎn)肝細(xì)胞中表達(dá)變化有意義的lncRNA有770條，其中差異表達(dá)的lncRNA有28條。分析在肝再生中有意義表達(dá)的lncRNA的具體表達(dá)情況

2、，發(fā)現(xiàn)有254條表達(dá)發(fā)生上調(diào)，464條表達(dá)下調(diào)，52條表達(dá)上/下調(diào)。差異表達(dá)的28條lncRNA中13條表達(dá)上調(diào)，12條表達(dá)下調(diào)，3條表達(dá)上/下調(diào)。為了解這些差異表達(dá)的lncRNA對(duì)肝再生的調(diào)節(jié)作用，采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其靶基因，結(jié)果表明lncRNA的共表達(dá)(TRANS作用)基因中表達(dá)差異的465條。lncRNA的調(diào)控(CIS作用)基因差異表達(dá)的10條。為進(jìn)一步篩選出待研究的lncRNA及其在肝再生中的作用，用DESeq，結(jié)合GO和K

3、EGG信息分析基因功能發(fā)現(xiàn)基因在細(xì)胞中具有多種作用。用Ingenuity中的Ingenuity Pathway Analysis(IPA)檢測(cè)大鼠肝再生不同時(shí)間點(diǎn)差異表達(dá)的基因相應(yīng)的蛋白質(zhì)在細(xì)胞中作用，結(jié)果顯示相關(guān)基因在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、細(xì)胞通訊、信號(hào)傳導(dǎo)、分子運(yùn)輸、細(xì)胞增殖、作為信號(hào)分子等方面具有一定的調(diào)控作用。IPA分析信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)lncRNA的靶基因主要參與的信號(hào)通路有ILK通路、ERK/MAPK通路、SAPK/JNK

4、 Signaling通路等。
　　本文從差異表達(dá)lncRNA中篩選其中的兩個(gè)并研究其對(duì)肝細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。高通量測(cè)序結(jié)果表明lncRNA TCONS_00027980和TCONS_00042303在肝再生不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)水平顯著變化，RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)再生肝組織中兩種lncRNA的RNA表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高通量測(cè)序結(jié)果是可信的。本文首先用干涉技術(shù)降低lncRNA在大鼠BRL-3A細(xì)胞中的表達(dá)水平，MTT法檢測(cè)BRL-3

5、A細(xì)胞的活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BRL-3A增殖情況的變化，RT-PCR和Western-blot用來(lái)檢測(cè)與增殖相關(guān)基因的表達(dá)情況。檢測(cè)結(jié)果表明MTT法檢測(cè)表明實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組細(xì)胞活性增加(P＜0.05);流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)顯示與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的S+G2/M期細(xì)胞數(shù)在一定程度上增加了(P＜0.05);而real-time PCR(RT-PCR)檢測(cè)mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖相關(guān)基因MYC、CCNA2、CCND1