大鼠肝葉切除后肝細(xì)胞再生相關(guān)蛋白篩選和初步分析.pdf

1、肝臟是動物體內(nèi)最為重要的器官之一，具有代謝、解毒、膽汁分泌、吞噬、防御等生理、生化功能，一旦肝臟功能衰竭，目前尚無有效的替代手段，但是肝臟本身卻具有強(qiáng)大的再生能力。自1931年Higgins建立大鼠2/3肝切除(partialhepatectomy，PH)模型以來，肝再生的研究已取得一定的進(jìn)展。但是大多數(shù)的研究尚局限于單個蛋白、基因、單條信號通路上，而肝再生是一個復(fù)雜的過程，單個蛋白、基因的研究不能完整解釋肝再生的機(jī)制，這主要是受研究技

2、術(shù)的限制。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)的發(fā)展成熟，為我們從整體上把握肝再生提供了技術(shù)平臺。因此我們設(shè)計(jì)此實(shí)驗(yàn)，對肝再生早期肝細(xì)胞的蛋白質(zhì)組改變進(jìn)行研究，邁出從整體上探索肝再生分子機(jī)制的第一步。 目的： 本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制大鼠70％肝切除模型，研究肝部分切除早期(0h、6h、24h)肝細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)變化，篩選得到與肝細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白質(zhì)，通過Internet查找這些蛋白的相關(guān)信息，綜合分析，從整體上探索肝再生的分子機(jī)制，為進(jìn)一步研究肝

3、再生奠定基礎(chǔ)。 方法： 本實(shí)驗(yàn)選擇雄性SD大鼠18只(體重190-210g)，隨機(jī)分3組，6h組、24h組和0h組，每組6只大鼠，采用Goss介紹的方法復(fù)制大鼠70％肝葉切除模型。6h組在肝葉切除后6h分離肝細(xì)胞，24h組在肝葉切除后24h分離肝細(xì)胞，0h組為肝部分切除后即刻分離的肝細(xì)胞。配制裂解液裂解細(xì)胞提取總蛋白，采用經(jīng)典的雙向電泳技術(shù)分離總蛋白，質(zhì)譜兼容的銀染方法檢測膠上蛋白質(zhì)，并使用imagermaster2Ds

4、oftware2002.2膠圖分析軟件分析三個時相點(diǎn)膠圖的差異，再采用MALDI-TOF質(zhì)譜儀獲得術(shù)后早期變化明顯的蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋圖譜，用Mascot軟件在swiss-prot蛋白數(shù)據(jù)庫里對獲得的肽質(zhì)量指紋進(jìn)行查詢和鑒定，并結(jié)合Pubmed數(shù)據(jù)庫查閱所得蛋白質(zhì)的相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果： 1.本實(shí)驗(yàn)通過比較肝部分切除術(shù)后0h、6h、24h的肝細(xì)胞蛋白質(zhì)組的差異，最終篩選得到在此三個時相點(diǎn)變化最明顯的42個蛋白質(zhì)

5、點(diǎn)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)將所得蛋白質(zhì)按功能分類，其中與肝臟代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)有9個(Fattyacid-bindingprotein等)，與DNA合成、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)合成相關(guān)的蛋白質(zhì)有11個(CentromereproteinS、CentromereproteinM、Proteasomesubunitbetatype7precursor等)，與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖有關(guān)的蛋白質(zhì)有17個(Histonedeacetylase、Amyloidprotein-b

6、indingprotein1、Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein等)，其他功能的蛋白質(zhì)有5個； 2.這些蛋白點(diǎn)主要呈現(xiàn)出三種變化規(guī)律：持續(xù)升高、降低后升高、升高后降低：其中有14個蛋白(Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein2、Mitogen-activatedproteinkinase3等)表達(dá)在6h、24h都高于0h；有13個

7、蛋白(Proteasomesubunitbetatype7precursor、Transmembraneprotein115等)的表達(dá)在6h降低而24h又增強(qiáng)；有7個蛋白表達(dá)在6h增強(qiáng)而24h又減弱。 結(jié)論： 1.參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的蛋白質(zhì)如淀粉樣蛋白結(jié)合蛋白、Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein，DRG等是變化最明顯的一類蛋白，表現(xiàn)為術(shù)后表達(dá)的持續(xù)升高，可能通過各自的信號

8、通路直接調(diào)節(jié)肝再生。 2.參與肝細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制的蛋白質(zhì)術(shù)后呈現(xiàn)明顯的波動，一部分表現(xiàn)為先高后低，如Centromereprotein，一部分表現(xiàn)為先低后高，如Histonedeacetylase，提示這類蛋白在肝臟損傷后修復(fù)過程中，表現(xiàn)出不同的功能。 3.參與肝臟脂代謝的蛋白在術(shù)后變化明顯，表現(xiàn)為不同的表達(dá)方式，提示這類蛋白在肝再生的過程中有復(fù)雜的功能。 本實(shí)驗(yàn)對肝部分切除后0h、6h、24h三個時相點(diǎn)的肝