大鼠肝葉切除后肝細胞再生相關蛋白篩選和初步分析.pdf

1、肝臟是動物體內最為重要的器官之一，具有代謝、解毒、膽汁分泌、吞噬、防御等生理、生化功能，一旦肝臟功能衰竭，目前尚無有效的替代手段，但是肝臟本身卻具有強大的再生能力。自1931年Higgins建立大鼠2/3肝切除(partialhepatectomy，PH)模型以來，肝再生的研究已取得一定的進展。但是大多數(shù)的研究尚局限于單個蛋白、基因、單條信號通路上，而肝再生是一個復雜的過程，單個蛋白、基因的研究不能完整解釋肝再生的機制，這主要是受研究技

2、術的限制。蛋白質組學相關技術的發(fā)展成熟，為我們從整體上把握肝再生提供了技術平臺。因此我們設計此實驗，對肝再生早期肝細胞的蛋白質組改變進行研究，邁出從整體上探索肝再生分子機制的第一步。 目的： 本實驗通過復制大鼠70％肝切除模型，研究肝部分切除早期(0h、6h、24h)肝細胞的蛋白質組學變化，篩選得到與肝細胞增殖相關的蛋白質，通過Internet查找這些蛋白的相關信息，綜合分析，從整體上探索肝再生的分子機制，為進一步研究肝

3、再生奠定基礎。 方法： 本實驗選擇雄性SD大鼠18只(體重190-210g)，隨機分3組，6h組、24h組和0h組，每組6只大鼠，采用Goss介紹的方法復制大鼠70％肝葉切除模型。6h組在肝葉切除后6h分離肝細胞，24h組在肝葉切除后24h分離肝細胞，0h組為肝部分切除后即刻分離的肝細胞。配制裂解液裂解細胞提取總蛋白，采用經(jīng)典的雙向電泳技術分離總蛋白，質譜兼容的銀染方法檢測膠上蛋白質，并使用imagermaster2Ds

4、oftware2002.2膠圖分析軟件分析三個時相點膠圖的差異，再采用MALDI-TOF質譜儀獲得術后早期變化明顯的蛋白點的肽質量指紋圖譜，用Mascot軟件在swiss-prot蛋白數(shù)據(jù)庫里對獲得的肽質量指紋進行查詢和鑒定，并結合Pubmed數(shù)據(jù)庫查閱所得蛋白質的相關文獻，進行綜合分析。 結果： 1.本實驗通過比較肝部分切除術后0h、6h、24h的肝細胞蛋白質組的差異，最終篩選得到在此三個時相點變化最明顯的42個蛋白質

5、點。根據(jù)相關文獻將所得蛋白質按功能分類，其中與肝臟代謝有關的蛋白質有9個(Fattyacid-bindingprotein等)，與DNA合成、轉錄以及蛋白質合成相關的蛋白質有11個(CentromereproteinS、CentromereproteinM、Proteasomesubunitbetatype7precursor等)，與調節(jié)細胞增殖有關的蛋白質有17個(Histonedeacetylase、Amyloidprotein-b

6、indingprotein1、Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein等)，其他功能的蛋白質有5個； 2.這些蛋白點主要呈現(xiàn)出三種變化規(guī)律：持續(xù)升高、降低后升高、升高后降低：其中有14個蛋白(Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein2、Mitogen-activatedproteinkinase3等)表達在6h、24h都高于0h；有13個

7、蛋白(Proteasomesubunitbetatype7precursor、Transmembraneprotein115等)的表達在6h降低而24h又增強；有7個蛋白表達在6h增強而24h又減弱。 結論： 1.參與調節(jié)細胞增殖的蛋白質如淀粉樣蛋白結合蛋白、Developmentally-regulatedGTP-bindingprotein，DRG等是變化最明顯的一類蛋白，表現(xiàn)為術后表達的持續(xù)升高，可能通過各自的信號

8、通路直接調節(jié)肝再生。 2.參與肝細胞DNA轉錄、復制的蛋白質術后呈現(xiàn)明顯的波動，一部分表現(xiàn)為先高后低，如Centromereprotein，一部分表現(xiàn)為先低后高，如Histonedeacetylase，提示這類蛋白在肝臟損傷后修復過程中，表現(xiàn)出不同的功能。 3.參與肝臟脂代謝的蛋白在術后變化明顯，表現(xiàn)為不同的表達方式，提示這類蛋白在肝再生的過程中有復雜的功能。 本實驗對肝部分切除后0h、6h、24h三個時相點的肝